cAMP广泛存在于各种细胞中,对细胞的功能和代谢起着重要的调节作用,我们结合目前较为热门的荧光标记技术,以一种可直接被cAMP活化的交换蛋白Epac为靶蛋白与黄色荧光蛋白变体cpYFP相融合,设计并构建了多种结构模型的荧光探针并利用大肠杆菌原核系统进行表达,后通过多种修饰手段进行高通量筛选优化,最终得到一个对cAMP具有高特异性及灵敏度的探针,同时尝试建立大肠杆菌及哺乳动物活细胞内检测方法,为探究cAMP在正常生命活动或病理状态下的合成水平及代谢过程中相关生理变化提供了有力的技术支持。Azurin是一种对氧化还原敏感的铜蓝蛋白,为进一步了解Azurin活性中心及附近配位氨基对蛋白分子构象的影响,我们将Azurin基因克隆至原核载体构建Azurin蛋白重组质粒,后在铜配位中心附近将其与一种激发发射波长与其特征峰相近的红色荧光蛋白mcherry融合并在大肠杆菌中诱导表达,最终成功构建了基于Azurin的氧化还原敏感的荧光探针,在不同氧化还原条件下融合蛋白荧光会发生相应的变化,为进一步探究Azurin蛋白活性中心分子构象及其环境敏感性提供了有效的工具。