人肝再生增强因子基因的克隆、真核表达载体构建及原核表达

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人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)是一种新的细胞因子,能特异性地刺激肝源细胞的增殖,并对四氯化碳、半乳糖胺等肝毒剂引起的肝损伤有治疗作用.该课题选用hALR作为研究对象,重点研究其分子克隆、真核表达载体构建及原核表达.该实验成功地克隆出431bp的hALR基因片段,经序列分析表明,与Genebank中发表的hALR序列相比有3个位点(第36、177、312位)的碱基不同,同源性达99.4﹪.并完成了真核表达载体的构建,为hALR基因的真核表达做好了前期准备.hALR基因原核诱导表达后,Western-blot证实获得了18.7KD的融合蛋白.首次揭示在未诱导的情况下,hALR也有少量表达.对表达蛋白的定量分析得出,当IPTG终浓度为1.0mmol/L,诱导3个小时蛋白表达量最大.
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