论文部分内容阅读
目的：研究常氧和缺氧培养条件下类风湿性关节炎（RA）患者成纤维样滑膜细胞表达缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）的差异性及相关性。同时探讨shRNA特异性干扰沉默缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）后对RA成纤维样滑膜细胞的VGEF表达及其增殖的影响。方法：1.运用组织块培养法分离培养RA患者的成纤维样滑膜细胞，同时分离培养骨关节炎（OA）患者关节成纤维样滑膜细胞并设为对照组。将两组细胞分别置于常氧和缺氧条件下培养不同时间，根据细胞培养条件及培养时间分为常氧组、缺氧6h组及缺氧12h组；采用免疫印迹法（Western blot）检测各组滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达情况并进行相关分析。2.将RA患者滑膜细胞分为4组：常氧组、缺氧组、阴性质粒组（转染阴性质粒）和阳性质粒组（转染HIF-1α阳性质粒）。常氧组于常氧条件下进行培养，后三组于缺氧条件下进行培养12h；采用免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR（real-time PCR）法分别检测各组滑膜细胞中HIF-1α及VEGF的蛋白和mRNA表达情况，并进行相关性分析。将缺氧组、阴性质粒组和阳性质粒组的滑膜细胞分别于缺氧条件下培养6h、12h、24h及48h，应用MTS法检测缺氧对滑膜细胞增殖的影响。结果：1.常氧组的RA与OA患者滑膜细胞HIF-1α及VEGF蛋白表达无明显差异（P均＞0.05）；而缺氧6h及12h组的RA和OA患者成纤维样滑膜细胞的HIF-1α及VEGF蛋白表达水平较常氧组均显著升高（P均＜0.05）；且缺氧12h组的RA和OA患者成纤维样滑膜细胞的HIF-1α及VEGF蛋白表达又高于缺氧6h组（P均＜0.05）。RA患者滑膜细胞在缺氧6h及12h条件下的HIF-1α和VEGF蛋白表达均高于同组的OA患者（P均＜0.05）。上述RA和OA患者滑膜细胞的HIF-1α与VEGF的表达均呈正相关（rRA=0.871；rOA=0.759，P均<0.05）。2.缺氧组的RA滑膜细胞HIF-1α和VEGF蛋白及其mRNA表达水平较常氧组明显升高（P均＜0.05）；阴性质粒组和缺氧组的滑膜细胞HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA表达水平无明显差异（P均＞0.05）；而阳性质粒转染组的滑膜细胞HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA与缺氧组相比表达有所下降（P均＜0.05）。上述RA滑膜细胞的HIF-1α与VEGF蛋白表达呈正相关（r=0.89，P＜0.01），且其HIF-1α与VEGF的mRNA表达也呈正相关（r=0.79，P＜0.01）。通过分析缺氧条件对RA滑膜细胞增殖情况的影响发现，缺氧培养12h后阳性质粒组的滑膜细胞生长较缺氧对照组和阴性质粒组的滑膜细胞生长均减慢（P均＜0.05）；而后两组滑膜细胞的生长无明显差异（P＞0.05）。结论：1.在缺氧条件下，RA滑膜细胞的HIF-1α及VEGF表达显著升高且密切相关，推测“缺氧-HIF-1α-VEGF”这一信号途径与在RA的发生、发展有着密切关系。2. RNA干扰沉默HIF-1α表达能有效下调RA成纤维样滑膜细胞中HIF-1α及VEGF的蛋白和mRNA的水平，并且能抑制滑膜细胞缺氧条件下的异常增殖。