脑缺血再灌注大鼠远隔小脑代谢变化的核磁共振波谱研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mnbv808
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背景和目的:  缺血性脑血管病(Ischemic cerebrovascular disease,ICVD)约占脑血管病的60~80%,其致残、致死及复发率均较高。目前ICVD治疗的关键在于及时挽救缺血半暗带可逆性损伤的神经元,以及促进脑缺血损伤后神经功能恢复。临床实践证明,溶栓治疗对于急性期脑缺血患者的神经保护作用效果非常明显,且可显著改善其临床症状。然而因受限于溶栓治疗时间窗,仍有50~70%的幸存者遗留瘫痪、失语等严重后遗症。  近年来研究发现,幕上局灶性脑损伤后可引起远隔小脑区域出现继发性的功能改变,表现为远隔小脑区域血流量减少和代谢减低,这种现象被称之为“交叉性小脑神经机能联系不能”。脑梗死是导致CCD的重要因素,约50%以上脑梗死患者存在CCD现象。脑梗死患者损伤相关网络与康复相关网络在解剖结构上有重叠,一侧脑梗死后运动功能的恢复可由梗死后远隔部位脑组织功能所促进,这也进一步提示CCD在脑梗死患者的康复中起重要作用。然而,对于ICVD患者远隔小脑组织的代谢变化特征及其发生机制目前尚不甚清楚。  核磁共振代谢组学将核磁共振1H谱(1H NMR)检测与多元统计方法相结合,因其系统性和整体性等突出特点,迅速应用到生命科学研究的诸多领域,尤其是在疾病早期诊断和病理机制阐述方面。1H NMR代谢组学可以连续监测包括Glu、Gln、GABA、NAA、Cho等多种与能量代谢密切相关的物质浓度。因此,本文应用基于1H NMR的代谢组学技术,对永久性大脑中动脉闭塞(Middle cerebralartery occlusion,MCAO)及脑缺血再灌注模型大鼠不同部位脑组织代谢物含量进行检测并分析,旨在从分子水平了解脑缺血再灌注后大脑组织代谢物的变化特点,并探讨脑缺血再灌注后远隔小脑区域的代谢变化,为脑缺血患者的诊断与治疗提供准确的生物化学信息。  材料与方法:  1.选取64只健康雄性SD大鼠,体重250-320g,平均(283.1±16.4)g。采用随机数字法将SD大鼠分成三组:假手术组(n=12)、永久性大脑中动脉闭塞组(pMCAO组)(n=29)和脑缺血再灌注组(tMCAO组)(n=23)。参照传统的Longa法建立pMCAO和tMCAO模型,并将Longa法评分为1~3分的大鼠纳入实验。  2.造模后24h,使用3.0T(Philips Achieva)超导高场磁共振扫描仪及4通道大鼠专用线圈,行头颅轴位T1加权成像(T1WI)和T2加权成像(T2WI)检查。  3.造模成功后7d将实验大鼠直接断头取脑,以液氮速冻大脑、小脑组织,然后保存在-80℃低温冰箱中。样品称重、萃取、离心及冷冻干燥后行1H NMR检测,采集1H NMR谱图、预处理NMR数据和识别模式并计算代谢物相对浓度。  4.应用SPSS13.0统计学软件对数据进行处理,计量资料以均数±标准差(mean±SD)表示,两组比较采用独立样本t检验,多组比较采用方差分析,P<0.05认为差异具有统计学意义。  结果:  1.30只大鼠最终完成实验,其中假手术组12只,pMCAO组7只,tMCAO组11只。虽然实验大鼠数量减少,但符合统计学样本数。  2.大鼠造模成功后24h,假手术组大鼠T1WI、T2WI未见异常信号,pMCAO组大鼠左侧大脑皮层及基底节均可见T1WI低信号、T2WI高信号影,tMCAO组大鼠仅左侧基底节可见T1WI低信号、T2WI高信号影。  3.pMCAO组较假手术组大鼠左侧大脑组织NAA、GABA、Glu、Suc相对浓度显著下降,而Gln、m-Ins、Lac相对浓度显著升高;tMCAO组较假手术组大鼠左侧大脑组织NAA、GABA、Glu、Suc、Cr相对浓度显著下降,而Gln、Gly、Ala、Lac相对浓度显著升高;tMCAO组较pMCAO组大鼠左侧大脑组织Gln、m-Ins相对浓度显著下降,而Ala相对浓度显著升高。  4.pMCAO组较假手术组大鼠右侧小脑组织Ala、Lac相对浓度显著下降,而GABA、Gln、m-Ins、Asp相对浓度显著升高;tMCAO组较假手术组大鼠右侧小脑组织Ala、Lac相对浓度显著下降,而Glu、m-Ins、Asp、Cr相对浓度显著升高;tMCAO组较pMCAO组大鼠右侧小脑组织Gln相对浓度显著下降。  结论:  1.幕上单侧脑梗死后对侧小脑出现代谢变化,可能与交叉性小脑神经机能联系不能有关。  2.幕上脑缺血恢复后可影响对侧小脑代谢。
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