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目的 1.体内外实验观察高糖环境下,足细胞极性标志物desmin、nephrin的表达变化,探讨高糖对足细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的影响;2.体内外实验观察足细胞转分化过程中整合素连接激酶(integrin linked kinase,ILK)的表达变化,ILK阻断后足细胞EMT的抑制情况,探讨ILK在足细胞EMT中的作用;3.观察中药单体大黄素对高糖诱导的足细胞EMT及ILK表达变化的影响,探讨大黄素治疗糖尿病肾病的机制。方法细胞试验:将条件性永生的小鼠足细胞随机分为高糖组(HG)、正常对照组(NG)、HG+大黄素组30ug/ml,高糖刺激+ILK阻断组(QLT0267)(1umol/l)干预组。采用免疫荧光、Western blot、real time RT-PCR检测ILK、nephrin和desmin的表达变化,各项指标间作相关分析。动物试验:雄性健康SD大鼠,STZ造模成功后随机分为下列几组:①DM组:予等量生理盐水灌胃;②DM+大黄素组:予灌胃大黄素20 mg·kg-1·d-1;③DM+ILK阻断组:腹腔注射QLT0267剂量10mg·kg-1·w-1;④正常对照组:每日给予等量生理盐水。用药12周取肾组织,免疫组化、Western blot及real time RT-PCR等方法检测大足细胞转分化标志物nephrin、desmin及ILK的表达变化,与大鼠生化指标及尿ACR做相关分析。结果 1.和正常糖组比较,高糖组足细胞desmin表达增加,nephrin表达减少,高糖组足细胞发生EMT;和正常对照组比较,DM组肾脏足细胞desmin表达增加,nephrin表达减少,DM鼠足细胞发生EMT,尿ACR增高。2.高糖诱导EMT过程中ILK表达增加,阻断ILK后高糖诱导EMT作用减弱;DM鼠肾脏足细胞ILK表达增加,ILK阻断后足细胞EMT减弱,尿ACR减低。3.大黄素可减轻高糖诱导的EMT,同时使ILK表达减少;大黄素可使DM鼠足细胞EMT减轻,同时ILK表达减少,尿ACR减低。结论 1.高糖可诱导足细胞发生转分化;糖尿病肾病大鼠足细胞发生转分化,尿蛋白增加。2.高糖通过调节ILK信号通路诱导足细胞转分化。3.大黄素通过阻断ILK信号通路抑制高糖诱导的足细胞转分化,减少蛋白尿。