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在高等植物中,转录因子是基因表达过程中的重要调控因子,通过与下游基因启动子中顺式作用元件的相互作用,调控效应基因的表达,从而实现植物的生长发育和对外界刺激的应答。MYB类转录因子是指含有MYB结构域的一类转录因子,是植物转录因子家族中最大的家族。最近的研究发现,它们广泛参与植物次生代谢的调控,对激素和环境因子的应答,并对细胞分化、器官的形成及抗病具有重要的调节作用。但是,其家族成员MYB13在抗病防卫反应中的功能尚未得到详细阐述。本研究初步探索了激素处理及病原茵侵染后AtMYB13基因在拟南芥中的表达情况,通过原核表达获得了AtMYB13蛋白,并研究了其亚细胞定位情况,旨在阐述AtMYB13转录因子在拟南芥抗病防卫反应中的作用。1.AtMYB13转录因子抑制拟南芥对Pseudomonas syringae的抗性高等植物受到激素处理或病原菌侵染时,会激活一系列的防卫反应,其中涉及大量基因的转录调控。许多研究表明,MYB类转录因子在植物受病原物侵染后,通过调控寄主植物基因的表达,从而参与植物防卫反应。当植物受到外界不良环境如机械损伤、病虫害刺激时,筛管分子内会迅速合成胼胝质。研究表明,胼胝质的沉积与植物的抗性有关。本研究着重探讨AtMYB13转录因子在拟南芥对病原细菌Pst DC3000基本防卫反应中的作用。AtMYB13受激素如水杨酸、茉莉酸诱导后强烈表达。我们分析了AtMYB13在基本防卫信号通路突变体abi1-1、jar1-1ein2-1及nprl-1上受病原细菌诱导的表达模式。AtMYB13T-DNA插入突变体mybJ13接种Pst DC3000后,与野生型相比,叶片细菌繁殖数量减少约5倍,叶片胼胝质积累及细胞死亡增加,病害症状显著减轻,受水杨酸调控的PRl基因表达增强。基于对myb13突变体的分析表明,AtMYB13(?)印制植物对Pst DC3000的基本防卫反应。2.AtMYB13转录因子的蛋白表达与亚细胞定位转录因子在细胞核内与相关基因的启动子区域特异性结合互作,从而调控下游基因的转录表达。因此,在体外研究转录因子与DNA的互作情况,首先要获得转录因子蛋白。我们利用PCR方法从拟南芥野生型Col-0中扩增得到AtMYB13基因,融合蛋白纯化所需的His-tag标签后,导入pET3Oa(+)载体,获得重组质粒pET30a(+)-AtMYB13。经IPTG诱导原核表达后,进行SDS-PAGE电泳,得到分子量约为30kDa含组氨酸标记的融合蛋白条带。Western blot结果表明获得了较纯的AtMYB13融合蛋白。将AtMYB13基因连入pBI121-GFP表达载体,获得重组表达质粒pBI121-AtMYB13-GFP。由农杆菌EHA105介导转化洋葱表皮细胞,荧光显微观察结果表明AtMYB13转录因子定位于细胞核内。