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目的：在成骨分化过程中，若祖细胞在向终末成骨分化为成骨细胞过程中的信号通路中断，可导致骨肉瘤的生成。诱导骨肉瘤细胞向成骨方向分化，可能会抑制骨肉瘤细胞的恶性表型，因此，我们应用AdEasy腺病毒载体系统，构建具有成骨分化作用的人LMP-1基因腺病毒重组体，感染体外培养的骨肉瘤细胞系U2OS，并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达,为研究骨肉瘤细胞成骨分化奠定基础。方法：以K562细胞的cDNA为文库，采用PCR方法对LMP-1进行扩增，将目的基因通过TA克隆与pGEM-T载体连接并测序。双酶切后将目的基因插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV，经双酶切和测序鉴定，转染HEK-293T细胞系并通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测pAdtrack-CMV-LMP-1的表达。线性化pAdtrack-CMV-LMP-1，在BJ5183菌内完成与骨架质粒pAdeasy-1的同源重组，构建重组腺病毒质粒AdLMP-1。通过脂质体介导在HEK-293A细胞内包装出重组腺病毒AdLMP-1，大量扩增、纯化并测定滴度。用AdLMP-1感染骨肉瘤细胞系U2OS，通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测LMP-1在U2OS细胞中的表达。结果：限制性双酶切和DNA测序鉴定穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1构建成功，荧光显微镜证实转染了pAdtrack-CMV-LMP-1质粒的HEK-293T细胞质内有绿色荧光蛋白表达；RT-qPCR发现与空白对照、空载转染组相比，转染后24h，HEK-293T细胞LMP-1mRNA表达量升高800倍，转染后48h后升高1500倍，与对照组相比有统计学差异(*p<0.01)；Western blot验证了LMP-1及His标签蛋白的表达量明显高于对照组。AdLMP-1通过扩增、纯化滴度达到1.5x109pfu/ml。荧光显微镜下观察AdLMP-1感染的U2OS内有绿色荧光蛋白表达；RT-qPCR发现与空白对照、转染空载AdGFP组相比，转染24h后，U2OS细胞LMP-1mRNA表达量升高420倍，48h升高650倍，与对照组相比有统计学差异(*p<0.01)；Western blot检测发现AdLMP-1感染U2OS后，LMP-1的蛋白表达量明显高于对照组。结论：构建了人LMP-1基因腺病毒重组体—AdLMP-1，为下一步成骨分化抑制骨肉瘤恶性表型奠定了基础。