甲型流感病毒如何有效地实现自身mRNA的核质转运并选择性地抑制宿主细胞mRNA的出核,是目前流感病毒基础研究中的重要课题。本研究旨在构建一种简单而灵敏的三分子荧光互补系统,在活细胞内检测蛋白和mRNA相互作用,对甲型流感病毒mRNA活细胞内出核机制进行初步探讨。　　 mRNA介导荧光蛋白双片段互补即三分子荧光互补的概念是实现活细胞内mRNA-蛋白质相互作用可视化的新思路。基于本实验室前期建立的性能优越的mCherry双分子荧光互补系统,结合HIVRev-RRE、Tat-TAR等肽段-RNA序列的组合,本研究构建了一种基于mCherry的新型三分子荧光互补系统,可用于蛋白和mRNA在活细胞内相互作用的检测。　　 应用此三分子荧光互补系统,本研究筛选了流感病毒四种mRNA,包括不含内含子不需要剪接的NPmRNA,含内含子需要剪接的M2mRNA,含内含子不需要剪接的M1和NS1mRNA,分别和宿主细胞mRNA出核TAP途径相关蛋白SRp20、9G8、UAP56、hnRNPA1、Aly、TAP之间的相互作用。实验结果表明9G8、UAP56、hnRNPA1和Aly可能在流感病毒mRNA出核过程中和病毒mRNA结合,且流感病毒三种类型的mRNA在出核过程中和TAP途径相关蛋白结合情况存在差异。　　 另外,本研究利用基于mCherry的双分子荧光互补技术对甲型流感病毒NS1、M1、NP和M2等蛋白和细胞mRNA出核TAP途径相关蛋白之间可能的相互作用进行初步筛选,发现流感病毒NS1蛋白和SRp20、9G8、UAP56、hnRNPA1等蛋白BiFC可见明显信号,而和Aly、TAP蛋白则完全没信号。推测NS1蛋白在招募mRNA出核Tap途径相关蛋白的过程中可能发挥重要促进作用。　　 总之,本研究构建了一套基于mCherry的三分子荧光互补系统,并应用于流感病毒mRNA出核途径研究。发现TAP途径中的多种蛋白,如SRp20、9G8、UAP56、hnRNPA1和Aly可能在流感病毒mRNA出核中起作用。