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罗丹明是一类以氧杂蒽为母体的碱性咕吨的人工合成荧光染料,因其具有光稳定性好、对pH值不敏感、较高的量子产率等优点,是分析化学和生物医药科学等生物技术领域中最常用的荧光染料。罗丹明B有强烈荧光,曾经用作食品添加剂,当前由于罗丹明染料具有潜在的致癌和致突变性,中国和欧盟等都已不许在食品中使用。本实验旨在利用罗丹明B的荧光特异性,对罗丹明B在食品中的同步荧光检测方法进行优化。并在此基础上,研究罗丹明B在金鱼组织中的蓄积消除规律,深入研究罗丹明B对金鱼肝脏的氧化损伤和血细胞的凋亡诱导作用。研究结果如下：1.采用恒波长同步荧光法,以纯水为溶剂,选择步长Δλ=22nm条件下进行同步扫描,可实现罗丹明B和其他同存干扰物的同时鉴别和快速定量测定。实验表明,罗丹明B在555nm处出峰,线性范围为0.1～2μg/ml,检出限为5.21×10-5μg/ml。加标回收率为93%-101%。采用优化后的条件检测罗丹明B,灵敏度较高,准确度好,回收率也较为理想。该测定方法前处理简单,成本较低,可用于食品中禁用添加的快速多残留检测。2.金鱼(Carassius auratus)肝脏、肾脏、腮、肌肉和椎骨对不同质量浓度(5mg·L-1和15mg·L-1)罗丹明B的蓄积规律表明,采用注射染毒然后在清水中饲养的方法鱼体组织罗丹明B的消除规律为：罗丹明B浓度为5mg·L-1和15mg·L-1时,各组织内蓄积量随暴露时间的延长而增大,分别在第15d达到吸收平衡,其中鱼的肝脏和肾脏对罗丹明B的蓄积能力均较高,腮、肌肉、椎骨的蓄积能力较低,差异不明显。金鱼对罗丹明B的蓄积能力表现为：低染毒浓度的蓄积系数高,高染毒浓度的蓄积系数较低。蓄积达到平衡时罗丹明B在高、低染毒质量浓度中的最大和最小蓄积系数分别出现在肝脏和肌肉,最大蓄积系数分别为16.14和7.37,最小蓄积系数分别为0.97和0.77。注射染毒后金鱼组织罗丹明B消除研究结果表明：随时间延长各组织罗丹明B的浓度逐步下降,第9d接近平衡。不同组织中消除速度表现：肾脏>肌肉>椎骨>腮>肝脏。生物半衰期t1/2在不同组织中的差异表现为：肝脏>腮>椎骨>肾脏>肌肉。3.研究罗丹明B对金鱼的毒性作用：在正常情况下鱼体内SOD活性和H2O2、MDA的含量达到一定的动态平衡,暴露96h后,在不同浓度罗丹明B处理下,罗丹明B对金鱼SOD的诱导率随着毒液浓度的增加呈先上升的趋势,然后在染毒浓度为90mg/L时开始下降。金鱼肝脏H202和MDA的含量表现为逐渐升高的趋势,说明随污染液浓度增大,酶活力下降,H202和MDA含量增加。用DNA电泳对细胞凋亡进行定性分析来检测凋亡细胞DNA断裂情况,用流式细胞术检测细胞凋亡,以凋亡率为定量指标。结果表明,在正常对照组未见明显的凋亡梯状条带；而凋亡诱导组中经罗丹明B感染后,90,120mg/L组可见明显的凋亡梯状条带,30,60mg/L试验组则稍弱,与正常对照组相近。凋亡组中梯带亮度随罗丹明B浓度而增加。可说明罗丹明B进入金鱼体内后诱导血细胞凋亡。经AnnexinV-FITC/PI染色,流式细胞仪的检测结果可知,试验组细胞凋亡率明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05)。该结果表明,罗丹明B能导致金鱼血细胞凋亡。