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肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae，Cpn)作为衣原体属的一种重要的呼吸道病原微生物，自从上个世纪80年代中期正式命名以来得到了研究者们的广泛重视。所致疾病最常见的是肺炎和支气管炎，近年来诸多研究表明其与动脉粥样硬化综合症，老年痴呆症等疾病有关。Cpn分布极其广泛，大约有50．80％的成人血清可检出抗体。在我国，与Cpn感染相关的疾病发生率呈逐年上升趋势。目前检测Cpn的多种方法均存在一定的不足之处。因此，我们试通过制备针对Cpn的单克隆抗体(Monoclonal Antibody，McAb)，建立直接免疫荧光法(DirectImmunofluorescence Assay，DIF)，同时应用巢式聚合酶链反应(Polymerase ChainReaction，PCR)与核酸杂交(Southem Blotting)方法，检测人外周血单核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)中Cpn抗原和核酸。通过对以上检测结果的比较，较客观的评定每种方法的特异性和敏感性，以便用于辅助Cpn感染的临床诊断，分析Cpn感染与疾病的因果关系。
论文第一部分主要内容是，以进口Cpn抗原免疫BALB/C小鼠，将免疫的小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞融合，并用间接酶联免疫吸附法(Enzyme-LinkedImmunoadSorbent Assay，ELISA)筛选抗体阳性杂交瘤细胞。结果发现小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞的融合率为61.46％(236/384)。经克隆化及筛选后，最终获得4株稳定分泌CpnMcAb的细胞株。杂交瘤细胞接种小鼠后，收集小鼠腹水McAb，经纯化后用间接ELISA检测抗体效价，效价高者可达1：10<6>；免疫琼脂扩散试验鉴定McAb为IgG类；微量荧光免疫试验(Micro-immunofluorescenceAssay,MIF)检测McAb种属特异性发现，与鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci，Cps)出现一定程度的交叉反应，而与沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，Ct)则无交叉反应，此结果与进口Cpn MeAb一致。Dot-ELISA显示获得的单抗与39.5KD克隆表达的重组Cpn主要外膜蛋白(Major Outer Membrane Protein，MOMP)呈阳性结合反应，为Cpn MOMP特异性McAb。
论文第二部分是以FITC自行标记自制Cpn McAb，其荧光素与蛋白的比值(F/P)为2.28，成功获得荧光素标记的MeAb。用自制Cpn MeAb与进口CpnMcAb，建立了直接免疫荧光法(DIF)。用DIF同时检测240份PBMC标本的Cpn抗原，并进行统计处理。结果显示，两种McAb检测结果均阳性的共86份，SPSS软件分析自制Cpn McAb的特异性和敏感性均与进口McAb具有中等一致性。可用自制McAb替代进E1 McAb检测Cpn抗原，以辅助Cpn感染的临床诊断。与进口McAb相比，自制MeAb同样具有敏感性和特异性，且有方便、价廉的特点。以自制Cpn McAb对动脉粥样硬化等心血管疾病和某些呼吸道疾病组标本作Cpn抗原检测，阳性检出率分别为69.34％(95/137)和72.06％(49/68)，分别与正常对照组进行比较，统计结果证实均具显著性差异。提示对于动脉粥样硬化等某些疾病的发生和发展，Cpn感染可能是重要的原因之一，但其中的因果关系还有待深入研究。
论文第三部分通过设计Cpn特异性双引物，建立了巢式PCR检测方法，并对该方法进行了相关评价，发现具有很好的特异性和敏感性。在对240份PBMC标本进行核酸扩增检测中，呈阳性的有74.17％(178/40)，比DIF的阳性检出率略高，但并无统计学意义。其中，呼吸道疾病PBMC标本中，巢式PCR的阳性检出率为79.41％(54/68)，心血管疾病PBMC标本的则为75.18％(103/137)。通过Oligo 6.0软件设计针对巢式PCR第二步扩增产物，设计特异性DIG标记探针，建立了核酸杂交(Southem BloWing)试验，对24份巢式PCR扩增阳性的标本进行检测，阳性符合率为100％，更进一步确证巢式PCR扩增的是特异性Cpn核酸。
本课题通过杂交瘤技术制备并获得了4株稳定分泌特异性Cpn McAb的杂交瘤细胞株，经鉴定为On MOMP特异性McAb；建立了DIF、巢式PCR及核酸杂交试验，用这3种方法对临床标本进行检测，结果显示不仅具有良好的相符性，亦具有较好的敏感性和特异性，均可用于辅助Cpn感染的的临床诊断，尤其是自制McAb还具有方便、价廉的特点；选用心血管和呼吸系统疾病患者的PBMC标本，检测Cpn抗原及核酸，与正常对照组作统计比较，结果表明，动脉粥样硬化等心血管疾病与Cpn感染存在一定的因果关系，这对阐明疾病的发生和发展具有重要的临床意义；实验证明，检测PBMC标本中Cpn抗原和核酸，可用于Cpn感染的诊断和所致疾病的研究，具有重要的理论和实用价值。