中西药复方制剂，是指中药同一味乃至多味西药组合或西药与一味或多味中药组合后的复方制剂[17]。中西药复方注射剂因成分复杂，引起的不良反应也陆续被发现，开展中西药复方制剂的安全性评价至关重要。参芎葡萄糖注射液是由丹参提取液及盐酸川芎原料药组成的注射液，目前按照化学药品标准进行管理，为中西药复方制剂。实验结果表明：参芎葡萄糖注射液的安全性试验均符合规定。1豚鼠全身主动过敏（ASA）试验1.1试验目的根据对致敏成立的动物体内，静脉注射抗原，观察抗原与IgE抗体结合后导致肥大细胞、嗜碱性细胞脱颗粒、释放活性介质而致的全身性过敏反应的原理，观察参芎葡萄糖注射液全身给药对动物引起的过敏反应，为临床安全用药提供依据。1.2试验动物EWG/B雄性豚鼠18只，体重300～350g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，质量合格证号：SCXK-（吉）2007-0004。饲养条件：安静、清洁、干燥、通风；室温：22～25℃；湿度：50～60%。1.3试验分组取18只健康豚鼠，随机分成3组，每组6只，第1组为阴性对照组（给5%葡萄糖注射液）；第2组为参芎葡萄糖注射液组；第3组为阳性对照组（给1%卵白蛋白）。1.4给药途径及剂量选择给药途径：致敏时各组均采用腹腔注射给药，激发时各组均采用阴茎静脉注射给药；参芎葡萄糖注射液的致敏剂量为0.5mL/只，激发剂量为1.0mL/只。阳性对照组给予卵白蛋白2mg/只，阴性对照组给予等量的5%葡萄糖注射液。1.5致敏及激发致敏：各组动物均隔日腹腔注射一次相应受试药物，共3次，给药剂量为0.5mL/只；激发：于首次给药后第14日和21日，各组动物分别阴茎静脉注射受试药物1.0ml/只进行激发，于给药后立刻至60min，观察每只动物有无发抖、搔鼻、喷嚏、咳嗽、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克及死亡等过敏反应，症状的出现及消失时间。2大鼠被动皮肤过敏（PCA）试验2.1试验目的将致敏动物的血清（内含丰富的IgE抗体）皮内注射于正常动物。IgE与皮肤肥大细胞的Fcз受体结合，使之被动致敏。当致敏抗原激发时，引起局部肥大细胞释放过敏介质，从而使局部血管的通透性增加，注入染料可渗出于皮丘，形成一个蓝斑。通过分光光度计法测定，判定参芎葡萄糖注射液的过敏反应程度，为临床安全用药提供依据。2.2试验动物健康Wistar大鼠，体重90～180g，雌雄各半，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，质量合格证号：SCXK-（吉）2008-0005。饲养条件：安静、清洁、干燥、通风；室温：22～25℃；湿度：50～60%。2.3试验分组取16只健康Wistar大鼠，随机分成4组，每组4只，第1组为阴性对照组（给5%葡萄糖注射液10ml/kg），第2组为参芎葡萄糖注射液0.8mg/kg组，第3组为参芎葡萄糖注射液2mg/kg组，第4组为阳性对照组（给卵白蛋白10mg/kg）。2.4致敏另取体重90～100g大鼠8只，分为阴性对照组（给5%葡萄糖注射液10ml/kg）、参芎葡萄糖注射液0.8mg/kg组、参芎葡萄糖注射液2mg/kg组及阳性对照组（给卵白蛋白10mg/kg），每组2只。隔日静脉注射致敏一次，阳性对照组同时腹腔注射百日咳杆菌2×1010个/只，共5次。末次致敏后10日采血，1000转/分离心10分钟，分离血清，-20℃保存，2周内备用。2.5激发根据国家《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》要求进行试验。各组大鼠在动物背部两侧预先脱毛3×4cm2的皮内注射各对应组的抗血清（用生理盐水稀释成1：2、1：8、1：32），每一稀释度注射二点，每点0.1ml。24小时后，各组大鼠静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加等量的0.5%伊文思兰染料共1.0ml。30min后断头处死大鼠，用1cm的打孔器取下注射抗血清处的皮肤，剪碎后放入5mL的丙酮生理盐水溶液中，24小时后，于590nm处测定OD值。3.体外溶血性试验3.1试验目的考察参芎葡萄糖注射液对红细胞有无溶血、部分溶血或凝聚等反应，为临床安全用药提供依据。3.2试验动物雄性日本大耳白家兔（CBWR/B），体重2.2kg，由吉林大学实验动物中心提供，质量合格证号：SCXK-（吉）2008-0004，未用于任何试验。饲养条件：清洁、凉爽、干燥、通风，室温20±2℃，湿度40～60％。3.3试验分组第1组为对照组（给5%葡萄糖注射液），第2组为参芎葡萄糖注射液组（给参芎葡萄糖注射液原液）。3.42%红细胞混悬液的制备取家兔血约10mL，置于装有玻璃珠的三角瓶中振摇10min，除去纤维蛋白原，制成脱纤血液，加入约10倍量的氯化钠注射液，摇匀，移入离心管内，于离心机2500转/min离心5min，除去上清液。沉淀的红细胞再用氯化钠注射液混匀、离心，反复几次，直至上清液呈无色透明方可用于试验。将所得红细胞按其体积用氯化钠注射液配成2%的混悬液，供试验用。3.5试验过程试验分二批进行，第一批受试药品为5%葡萄糖注射液：取7支试管并编号，1～5号管依次加入5%葡萄糖注射液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，0.9%氯化钠注射液（生理盐水）2.4、2.3、2.2、2.1、2.0mL，各管均加入2%红细胞混悬液2.5mL，第6号管只加0.9%氯化钠注射液及2%红细胞混悬液各2.5mL作为空白对照管，第7管只加蒸馏水及2%红细胞混悬液各2.5mL作为溶血的阳性对照。将各管轻轻摇匀后，置37℃恒温水浴中，记录30min及1、2、3、4h的结果。第二批受试药品为参芎葡萄糖注射液，试验过程同第一批。结果判断：如溶液呈透明红色，即表示溶血；如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚；如红细胞全部下沉，上层液无色澄明即为无溶血。4家兔血管刺激性试验4.1试验目的考察参芎葡萄糖注射液在家兔耳缘静脉注射过程中，对血管产生的影响，为临床安全用药提供依据。4.2试验动物日本大耳白家兔（CBWR/B），体重2.0～2.5kg，雌雄各半，由吉林大学实验动物中心提供，质量合格证号：SCXK-（吉）2008-0004，未用于任何试验。饲养条件：清洁、凉爽、干燥、通风，室温20±2℃。4.3试验分组12只家兔随机分成2组，每组6只，第1组为对照组（给5%葡萄糖注射液），第2组为参芎葡萄糖注射液组（给参芎葡萄糖注射液100mL/只）。4.4试验过程取家兔12只，雌雄兼用（雌者无孕），6只/组，受试药物组家兔耳缘静脉滴注参芎葡萄糖注射液100ml，对照组家兔耳缘静脉滴注等体积5%葡萄糖注射液，每日1次，连续7日。除每次给药时及药后观察给药局部反应外，于末次静点后24小时剪下药测耳廓，常规固定后，于距静点入针近心端1cm处，每隔1cm切取0.5cm宽标本，共取三块标本。肉眼观察有无充血、水肿等现象外，作组织切片染色，进行镜下病理观察。5家兔肌肉刺激性试验5.1试验目的考察参芎葡萄糖注射液在家兔肌肉注射过程中，对注射部位产生的影响，为临床安全用药提供依据。5.2试验动物日本大耳白家兔（CBWR/B），体重2.4～2.5kg，雌雄各半，由吉林大学实验动物中心提供，质量合格证号：SCXK-（吉）2008-0004，未用于任何试验。饲养条件：清洁、凉爽、干燥、通风，室温20±2℃。5.3试验分组4只家兔随机分成2组，每组2只，第1组为对照组（给5%葡萄糖注射液），第2组为参芎葡萄糖注射液组（给参芎葡萄糖注射液1mL/只）。5.4试验过程取家兔4只，雌雄各半（雌者无孕）。每只家兔左侧后肢用强力碘消毒后，于股四头肌处注射参芎葡萄糖注射液1ml，右侧对应部位同法注射等容积5%葡萄糖注射液作为对照。每日1次，连续3日。末次注射后48h，由耳静脉注入空气处死动物，解剖取出股四头肌，观察变化情况，并按表8换算成相应的反应级。而后，用10%的甲醛固定后，送检病理，显微镜下观察股四头肌的炎性细胞浸润、增生、坏死情况。6结果6.1对豚鼠ASA的影响实验结果表明，5%葡萄糖注射液组及参芎葡萄糖注射液组的12只豚鼠于给药后未出现过敏反应症状，无一死亡。卵白蛋白阳性对照组6只豚鼠均不同程度的出现搔鼻、立毛、发抖、喷嚏、咳嗽、呼吸困难、喘息、痉挛、大小便失禁等明显过敏反应症状，30分钟内5只豚鼠死亡，另外一只豚鼠1小时16分钟恢复正常。说明参芎葡萄糖注射液的豚鼠ASA试验符合规定。6.2对大鼠PCA的影响实验结果表明，与5%葡萄糖注射液组比较，卵白蛋白组OD值明显增高（p<0.05），参芎葡萄糖注射液0.8mg/kg及2.0mg/kg组OD值均无明显差异（p>0.05），说明参芎葡萄糖注射液的大鼠PCA试验符合规定。6.3对体外溶血性的影响试验结果表明，蒸馏水组可见溶液呈透明红色，发生了溶血；5%葡萄糖注射液组及参芎葡萄糖注射液组均可见红细胞全部下沉，上层液无色澄明，未见棕红色或红棕色絮状沉淀，表明5%葡萄糖注射液及参芎葡萄糖注射液在观察4h内均无溶血，亦未见红细胞凝聚，室温下放置24h无任何改变。6.4对家兔血管刺激性的影响实验结果表明：肉眼观察，参芎葡萄糖注射液组可见兔耳血管不同程度扩张充血，未见出血及红肿，5%葡萄糖注射液组未见血管扩张充血、出血及红肿，见表7；镜下病理检查，5%葡萄糖注射液组及参芎葡萄糖注射液组均未见注射部位血管水肿，炎细胞浸润及坏死等改变（见附件1病理报告及照片1-12）。表明参芎葡萄糖注射液静脉注射血管刺激性试验符合规定。6.5对家兔肌肉刺激性的影响实验结果表明，5%葡萄糖注射液组及参芎葡萄糖注射液组2只家兔4块股四头肌反应级之和均在0～2，见表9。病理切片观察股四头肌无炎性细胞浸润、增生、坏死等情况。表明参芎葡萄糖注射液对注射部位没有明显刺激作用，肌肉刺激性试验符合规定（见附件2病理报告及照片13-20）。