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目的:多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)是一种累及中枢神经系统(CNS)的慢性炎性脱髓鞘性疾病,其发病机制尚不明确。研究表明,氧化应激和线粒体损伤在MS的发病机制中起重要作用。本实验研究不同剂量丁苯酞对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠脊髓组织中氧化应激指标HO-1和线粒体损伤标志物SOD2、Mfn2表达水平的影响。初步探讨丁苯酞对EAE小鼠神经功能障碍的保护作用及其可能的作用机制。方法:C57BL/6小鼠使用MOG35-55作为抗原免疫建立EAE模型。以神经功能评分2分及以上为模型成功,随机分为低剂量NBP组、高剂量NBP组、地塞米松组和EAE组,并设正常对照组。低剂量NBP组(LDN)、高剂量NBP组(HDN)小鼠分别腹腔注射丁苯酞80mg/kg/d、120mg/kg/d。地塞米松组(DXM)小鼠给予地塞米松磷酸钠注射液0.07mg/kg/d腹腔注射;正常对照组及EAE组小鼠每日腹腔注射等体积DMSO,共14天。分别于发病后第0天、第7天及第14天三个时间点观察C57BL/6小鼠自免疫后的精神状态、活动情况、发病情况及神经功能评分。随后处死小鼠取脊髓组织,以HE染色在光学显微镜下观察小鼠脊髓炎症细胞的浸润情况;以免疫组化方法观察小鼠脊髓腰膨大部位HO-1、SOD2及Mfn2的表达情况;黄嘌呤氧化法测定血清SOD的浓度;使用q RT-PCR方法测定小鼠脊髓腰膨大部位HO-1m RNA、SOD2m RNA以及Mfn2m RNA的表达水平。结果:1各组小鼠临床表现观察:正常对照组小鼠在整个实验中均正常,且体重逐渐增加。EAE组小鼠抗原免疫后出现精神萎靡、食欲下降、体重下降等表现。EAE组小鼠发病达高峰期时症状最严重,小鼠出现背部溃疡、四肢瘫痪及大小便失禁。低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组小鼠发病给予药物治疗后,与EAE组小鼠比较,体重下降程度较轻,临床症状表现相对较轻。2神经功能评分比较:计算各组中每只小鼠的最高神经功能评分的均数,并进行比较。EAE组小鼠神经功能评分高于低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组(P<0.05)。高剂量NBP组神经功能评分明显低于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P<0.05);低剂量NBP组与地塞米松组小鼠神经功能评分相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3各组小鼠脊髓组织HO-1表达情况比较:分别于后第0天、第7天及第14天时,EAE组、低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组与对照组相比,小鼠脊髓组织HO-1m RNA表达水平、HO-1阳性细胞数明显增多,差异均具有统计学意义(P<0.05)。于发病高峰期及缓解期小鼠脊髓组织中,低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组上述指标高于EAE组(P<0.05);高剂量NBP组上述指标明显高于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P<0.05);低剂量NBP组与地塞米松组上述指标相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4各组小鼠脊髓组织SOD2表达情况比较:分别于后第0天、第7天及第14天时,EAE组、低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组与对照组相比,小鼠脊髓组织SOD2m RNA表达水平、SOD2阳性细胞数明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。于发病高峰期及缓解期小鼠脊髓组织中,低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组上述指标高于EAE组(P<0.05);高剂量NBP组上述指标明显高于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P<0.05);低剂量NBP组与地塞米松组上述指标相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。5各组小鼠脊髓组织Mfn2表达情况比较:分别于后第0天、第7天及第14天时,EAE组、低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组与对照组相比,小鼠脊髓组织Mfn2m RNA表达水平、Mfn2阳性细胞数明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。于发病高峰期及缓解期小鼠脊髓组织中,低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组上述指标高于EAE组(P<0.05);高剂量NBP组上述指标明显高于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P<0.05);低剂量NBP组与地塞米松组上述指标相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。6血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量比较:分别于后第0天、第7天及第14天时,EAE组、低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组与对照组相比,小鼠血清SOD浓度明显增多,差异均具有统计学意义(P<0.05)。低剂量NBP组、高剂量NBP组及地塞米松组小鼠血清SOD浓度高于EAE组(P<0.05);高剂量NBP组小鼠血清SOD浓度明显高于EAE组、低剂量NBP组及地塞米松组(P<0.05);低剂量NBP组与地塞米松组小鼠血清SOD浓度相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1 EAE发病早期就出现线粒体的损伤,丁苯酞与地塞米松均能降低EAE小鼠的神经功能障碍。2丁苯酞对于EAE小鼠神经功能缺失的保护作用存在剂量效应,大剂量丁苯酞能起到更好的神经保护作用。3丁苯酞对EAE小鼠的神经保护作用可能是通过增加抗氧化酶HO-1和线粒体中SOD2、Mfn2的水平来阻断ROS与线粒体损伤之间恶性循环,从减轻氧化应激以及保护线粒体二个方面对EAE小鼠起到神经保护作用。