【摘 要】
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大豆缺磷不仅会影响其生长发育,增加花荚脱落,抑制根瘤的形成,降低固氮效率,从而影响其产量和品质。了解大豆吸收利用磷的分子机制有助于培育磷高效品种。为了探索大豆在低磷耐受性蛋白质组学的差异机制,挖掘低磷胁迫响应的蛋白(基因),本研究以耐低磷夏大豆种质冬大豆-2(L2304)和低磷敏感型夏大豆种质黑豆(L2140)为实验材料,设置两个磷水平,分别为P+(1000μM KH2PO4)和P-(5μM KH
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大豆缺磷不仅会影响其生长发育,增加花荚脱落,抑制根瘤的形成,降低固氮效率,从而影响其产量和品质。了解大豆吸收利用磷的分子机制有助于培育磷高效品种。为了探索大豆在低磷耐受性蛋白质组学的差异机制,挖掘低磷胁迫响应的蛋白(基因),本研究以耐低磷夏大豆种质冬大豆-2(L2304)和低磷敏感型夏大豆种质黑豆(L2140)为实验材料,设置两个磷水平,分别为P+(1000μM KH2PO4)和P-(5μM KH2PO4),进行低磷胁迫的适应性试验,对低磷胁迫15 d的冬大豆-2(L2304)和黑豆(L2140)两个大豆种质根部的蛋白质利用非标定量蛋白质组学技术进行测序,并使用Max-Quant软件进行生物信息学分析。最后取不同时间点的大豆根部进行荧光定量检测以及对APase活性和全磷含量进行测定分析。本研究得到的结论如下:1.对低磷胁迫和正常磷条件下的冬大豆-2(L2304)和黑豆(L2140)根系进行蛋白质组学分析,结果表明,不同基因型的大豆响应低磷胁迫的蛋白表达存在较大差异。在低磷胁迫下,耐低磷夏大豆种质L2304产生了1489个下调蛋白,310个上调蛋白,低磷敏感型夏大豆种质L2140产生了1433个下调蛋白,323个上调蛋白。2.通过对两个夏大豆种质进行GO富集比较分析,总结出大豆耐低磷机制主要富集在氧化还原反应、脂质合成、脂肪酸代谢、过氧化氢代谢等方面。进行KEGG富集比较分析,总结出大豆耐低磷机制主要富集在代谢、次生代谢与合成、信号通路以及逆境调节等通路。3.通过对耐低磷种质L2304的耐低磷特异性差异蛋白筛选得出5个耐低磷候选蛋白,分别为:亚油酸酯9S-脂加氧酶(Glyma.15G026500)、苹果酸脱氢酶(Glyma.05G227400)、伯胺氧化酶(Glyma.20G145100)、果糖激酶(磷酸化)(Glyma.20G213300)和醛糖1-表异构酶(Glyma.13G064200)。4.在低磷胁迫下,对不同时间点的冬大豆-2(L2304)和黑豆(L2140)根系进行荧光定量q PCR分析。结果表明所有差异基因在L2304中均在15 d时表达量最高,在L2140中大多数差异基因在25 d时表达量最高,因此我们认为,低磷胁迫下这些耐低磷候选基因在低磷敏感型种质L2140中的表达要晚于耐低磷种质L2304约10 d。5.在低磷胁迫下,对不同时间点的冬大豆-2(L2304)和黑豆(L2140)根系的APase活性和全磷含量进行测定分析。结果表明APase活性在10~20 d时波动最大,随着时间的增长,大豆根部的全磷含量逐渐降低,但在20 d时突然增高。综合分析,我们认为低磷处理后10~20 d为磷敏感时期。
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