目的 虹膜色素上皮(IPE)细胞与视网膜色素上皮(RPE)细胞具有相同的胚胎发育来源，基本具备RPE细胞的生理功能，且取材方便，可望替代RPE细胞实现自体移植，治疗老年性黄斑变性(ARMD)、视网膜色素变性、黄斑营养不良等疾病。我们采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对兔眼IPE细胞和RPE细胞VEGF及其受体之一FLK-1 mRNA的表达进行检测和对比，为IPE细胞代替RPE细胞移植提供理论依据。 方法 实验动物：健康成年有色家兔。 IPE细胞和RPE细胞的分离：摘取家兔眼球，无菌操作下沿角膜缘后2mm环形剪开眼球壁，用0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA溶液将IPE细胞和RPE细胞分别消化分离下来，收集到eppendorf管内，立即放入干冰中并于-80℃保存备用。 IPE细胞和RPE细胞总RNA的提取：用TRIzol试剂分别提取两种细胞的总RNA。 PCR引物：目的基因为兔VEGF(AC：AB020216)、FLK-1(AC：AB017155)，内参基因为兔β-actin(AC：AF309819)。 RT-PCR：RT：应用逆转录酶AMV将IPE细胞和RPE细胞RNA分别逆转录生成cDNA。PCR：以逆转录产物为模板，以β-actin为内参，用PCR扩增各目的基因。 PCR产物电泳及定量分析：取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，凝胶图像分析软件分析并计算目的基因mRNA的相对含量。 以上实验重复四次，所得结果作两样本均数差异的t检验。 结 果 RNA样品鉴定：本实验所提取的总RNA完整，无明显降解。 RT－PCR产物定性表达及定量分析：兔眼IPE细胞和RPE细胞均可表达VEGF和FLK－lmRNA。IPE细胞的VEGF和F’’M－－ImRNA含量低于RPE细胞的VEGF和FLK－lmRNA含量。IPE细胞的 VEGF m叫A的表达量约为 RPE细胞的44．62％，FLK－lmRNA的表达量约为RPE细胞的52．36％，经统计学分析，结果有显著性差异。 结 论 渗出性ARMD患者视网膜下新生血管是导致视力下降的主要危险因素。新生血管来自脉络膜，穿过Bruch ’s膜侵人视网膜下，最终形成脉络膜新生血管膜（CNVM人并有渗漏，导致视力损害。VEGF在CNVM的形成和发展中是一个至关重要的血管源性生长因子。VEGF在ARMD患者的RPE细胞中表达水平增高，可能与此病的早期发病机制有关。RPE细胞分泌的VEGF可以影响ARMD患者中 CNVM的发生过程。大鼠 RPE细胞短期过度表达VEGF足以诱导脉络膜新生血管形成＊NV人 同种异体RPE细胞移植失败的主要原因是发生免疫排斥反应，而自体RPE细胞取材困难，由于来自患者自身明显病变RPE细胞的周围同种细胞，很可能也具有基因的缺陷，因此用于移植不够理想。体外研究已表明／PE细胞基本具备RPE细胞的形态特征、维生素A代谢、视细胞外节盘膜的吞噬、物质转运等维持视力的重要生理功能，且自体IPE细胞很易从自体的虹膜切除术取得， ·2·可望成为yE细胞合适的替代物。目前关于IPE细胞血管源性生长因子表达方面的研究鲜见报道。本实验对IPE细胞和RPE细胞VEGF及其受体FLK一 的表达情况进行了检测。结果表明，IPE细胞和 RPE细胞均可表达 VEGF和 FLK－lmRNA；IPE细胞的 VEGF和 FLK－lmRNA含量明显低于 RPE细胞的VEGF和FLK叫 含量。IPE细胞代替yE细胞移植到视网膜下可能会在刺激脉络膜或视网膜新生血管生成方面的作用小于 RPE细胞。VEGF及其受体在 RPE细胞中表达在视网膜前膜的生成中起重要作用。因此我们认为，IPE细胞血管源性生长因子的mRNA表达水平较RPE细胞低，IPE细胞移植用于治疗ARMD可能会更有利。