BMP4 shRNA重组腺病毒对C6细胞增殖、侵袭的影响

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目的:研究干扰BMP-4基因表达后对大鼠胶质瘤C6细胞增殖及细胞侵袭影响,观察腺病毒对C6细胞感染的敏感性,并探讨BMP-4对胶质瘤细胞生物学行为影响的相关机制,为基因治疗在控制人胶质瘤细胞生长及侵袭的应用上提供实验基础和理论依据。  方法:(1)以靶向BMP4的shRNA并携带有EGFP基因的重组腺病毒(rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA)感染C6细胞,应用Western Blot方法检测BMP-4基因的干扰效果。(2) RT-PCR检测rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染C6细胞后,细胞中EGFR、Caspase-3基因的变化。(3) MTS检测rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染C6细胞后对细胞增殖的影响。(4)划痕实验检测rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染C6细胞后,对细胞迁移的影响。  结果:(1)重组腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA感染C6细胞,相对于对照组,BMP-4蛋白的表达明显下降。(2) rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染C6细胞后,细胞中EGFR、Caspase-3基因表达降低。(3) rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染C6细胞后MTS检测提示较对照组OD值随时间升高幅度下降。(4) BMP4被干扰后,相对于对照组,C6细胞的迁移距离下降。  结论:携带EGFP基因的靶向BMP4的shRNA重组腺病毒对C6细胞易感。沉默BMP-4基因后可下调C6细胞的增殖性、侵袭性。BMP-4可作为胶质瘤基因治疗的靶点。
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