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近些年,随着我国养牛业的快速发展,各个地区之间牛只运输频繁,导致了运输应激相关传染病的增多,发现肉牛运输后出现牛呼吸疾病综合征,主要表现为肺部病变,发病率和致死率很高,严重影响了肉牛的育肥,给我国肉牛养殖业带来重大损失。病原学研究显示,该病主要为牛支原体感染所致,但常混合感染牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm),其血清型为A型,导致疾病治疗和预防复杂化。目前,临床上使用的牛多杀性巴氏杆菌疫苗,多用于预防牛出血性败血症,制苗菌株多为B型多杀性巴氏杆菌。但在多杀性巴氏杆菌中,不同的血清型交叉保护较差,免疫了B型Pm,无法保护牛抵御A型Pm的攻击。因此,本研究希望能够从临床分离株中筛选毒力强、免疫原性好的A型Pm作为制备A型Pm灭活疫苗的菌种,用于预防牛呼吸疾病综合征。同时,由于未从临床上分离到B型Pm,因此从中国兽医药品监察所购买一株背景清楚的B型Pm强毒株作为B型Pm灭活疫苗的菌种,制备牛多杀性巴氏杆菌A型、B型灭活疫苗,用于预防牛巴氏杆菌病。本实验室从湖北黄冈、洪湖、钟祥和河南驻马店发病肉牛场送检病变肺中分离到4株病原菌,经过菌落形态观察、培养特性、生化反应、PCR鉴定等一系列检测,确定这4株临床分离株均为A型多杀性巴氏杆菌,分别命名为Pm-HG、Pm-HH、 Pm-ZX和Pm-ZMD。比较4株临床分离株与参考株的生长特性,发现生长曲线与购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心的参考株无明显差异。小鼠毒力试验表明,Pm-HG、Pm-HH和Pm-ZX接种10个菌以下即可将小鼠致死,毒力均很强。将4株菌灭活后免疫小鼠,二免后两周,血清IgG抗体效价都在1：20000以上,其中Pm-ZMD和Pm-HG抗体效价最高。用各株菌进行交叉攻击,结果Pm-HG的交叉保护率最高,除能完全保护同种菌的攻击外,对其它3株菌的交叉保护率都在90%以上。因此将Pm-HG作为A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗的制苗菌株。从中国兽医微生物菌种保藏管理中心购买B型Pm强毒株CVCC44701,进行鉴定及培养特性的研究,检测毒力、免疫原性,以及与Pm-HG之间的交叉保护,结果表明CVCC44701毒力强,10个菌以下即可将小鼠致死；免疫原性较好,对小鼠免疫109CFU后,免疫保护率可达60%；与Pm-HG之间不存在交叉保护。将Pm-HG和CVCC44701按1：1比例制成牛多杀性巴氏杆菌A型、B型二价灭活疫苗,免疫小鼠后,对A型Pm的免疫保护率可达90%,对B型Pm的免疫保护率仅达到20%,且血清抗体效价均有所下降,表明制成联苗后,抗原之间相互拮抗,免疫效果下降。