第一部分：阻断HMGB1对慢加急性肝功能衰竭大鼠的影响目的：慢加急性肝功能衰竭是一种以肝功能损害,以及肝细胞大量坏死为核心症状严重疾病,具有很高的死亡率。HMGB1是近年来发现的一种强大的炎症调节因子。本研究应用HMGB1单克隆抗治疗慢加急性肝功能衰竭大鼠,观察HMGB1单克隆抗体对慢加急性肝功能衰竭大鼠的保护作用。方法：大鼠慢加急性肝功能衰竭模型由人血白蛋白,D—氨基半乳糖以及LPS联合诱导。大鼠被随机分为3组,正常组,模型组以及HMGB1单克隆抗体治疗组。HMGB1单克隆抗体治疗组大鼠在模型诱导后12小时及24小时时间点由尾静脉注射HMGB1单克隆抗体200μg/kg,正常组及模型组注射等剂量的生理盐水作为对照。采用鲎试剂检测各组大鼠血清内毒素水平,应用ELISA方法检测了血清HMGB1, TNF-α, IFN-γ水平,同时检测了各组大鼠肝脏组织学及肝细胞凋亡情况,并且应用Western b1ot方法检测了各组大鼠肝织中HMGB1, TLR4和P65的表达情况。结果：HMGB1单克隆抗体能够明显降低血清中内毒素,HMGB1, TNF-α, IFN-γ水平,改善肝组织的病理损害,减少肝细胞的凋亡,同时下调肝组织中HMGB1,TLR4, P65的表达量。结论：HMGB1单克隆抗体对慢加急性肝功能衰竭大鼠具有保护作用,即使是在模型诱导后24小时仍然有效。此效应可能与TLR4信号途径相关。第二部分：TLR4单克隆抗体对慢加急肝功能衰竭大鼠的影响目的：慢加急性肝功能衰竭是临床上常见危重症之一,TLR4信号途径及炎症因子HMGB1在其发病过程中发挥重要作用。本研究采用TLR4单克隆抗体对慢加急性肝功能衰竭大鼠进行治疗,观察TLR4信号途径被阻断后对慢加急性肝功能衰竭大鼠及炎症因子HMGB1的影响。方法：将32只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、IgG对照组及TLR4单克隆抗体治疗组。除正常组大鼠外,其余每组大鼠采用人血白蛋白,D-氨基半乳糖以及LPS联合诱导的大鼠慢加急性肝功能衰竭模型。IgG对照组大鼠在急性攻击24小时后,予以尾静脉注射兔抗鼠IgG100μg/kg作为对照。TLR4单克隆抗体治疗组大鼠在急性攻击24小时后,予以尾静脉注射兔抗鼠TLR4单克隆抗体100μg/kg。模型组大鼠尾静脉注射等量的生理盐水作为对照。观察TLR4单克隆抗体对大鼠肝脏组织学、血清ALI、TNF-α、IFN-γ和HMGB1水平以及肝组织中HMGB1水平的影响。结果：与正常组相比,模型组大鼠肝组织明显破坏,炎症细胞浸润明显,血清中ALT、TNF-α、IFN-γ和HMGB1水平明显升高(P<0.05)。TLR4单克隆抗体能够明显改善慢加急性肝功能衰竭大鼠肝脏组织病理学损害,降低血清中ALT、TNF-a、IFN-γ和HMGB1水平,并且降低肝组织中HMGB1水平(P<0.05)。而与模型组相比,以上指标在IgG对照组中无明显差异(P>0.05)。结论：TLR4单克隆抗体能够保护慢加急性肝功能衰竭大鼠并减少HMGB1胞外释放以及肝组织中HMGB1的产生。TLR4单克隆抗体,慢加急性肝功能衰竭,高迁移率族蛋白B1第三部分：阻断NF-κB和TNF-α对慢加急性肝功能衰竭大鼠的影响目的：在慢加急性肝功能衰竭的发病机制中,炎症介质HMGB1发挥着重要作用。而HMGB1主要通过TLR4-NF-κB信号通路在发挥其作用。而在TLR4-NF-κB信号通路中,NF-κB和TNF-α又是两个处于中心地位的炎症因子。本研究的目的在于探索NF-κB和TNF-α被阻断后对于慢加急性肝功能衰竭大鼠的影响。方法：本研究应用人血白蛋白,D一氨基半乳糖及脂多糖联合诱导大鼠慢加急性肝功能衰竭模型,并采用TNF-α多克隆抗体(TNF-α抑制剂)及吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC, NF-κB抑制剂)治疗肝功能衰竭大鼠,观察TNF-α多克隆抗体和PDTC对慢加急性肝功能衰竭大鼠的影响。本研究进一步采用PMA诱导U937细胞成为巨噬细胞,并应用LPS刺激,观察了PDTC对巨噬细胞的影响。结果：TNF-α和NF-κB抑制剂都能够有效降低肝脏和外周血中HMGB1水平以及血清中炎症因子的水平,并能够抑制TLR4-NF-KB信号通路。TNF-α抑制剂还能够延长慢加急性肝功能衰竭大鼠的存活时间提高生存率,相比之下,NF-κB抑制剂PDTC却加速了慢加急性肝功能衰竭大鼠的死亡。为了进一步研究PDTC在炎症反应中的作用,我们进一步检测了PDTC在U937细胞中的作用,结果显示PDTC能够提高U937细胞的活性,并且降低HMGB1水平以及血清中炎症因子的水平,并能够抑制TLR4-NF-κB信号通路。结论：TNF-α抗体和PDTC都能够抑制TLR4-NF-κB信号通路的激活,减少炎症因子的释放,抑制炎症反应。TNF-α抗体对慢加急性肝功能衰竭大鼠具有保护作用,而PDTC不能保护肝功能衰竭大鼠。