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钾离子通道是细胞膜上一类仅允许钾离子出入细胞的跨膜蛋白,通过通道的启闭控制着离子的跨膜流动,启动胞内各种重要的信息传导系统,参与多种细胞功能的调节。SKCa2属于小电导钙激活型钾离子通道(KCa)家族,具有K+选择性、Ca2+高敏感性和电压不依赖性等特性,是淋巴细胞上一种重要的钾离子通道。当淋巴细胞受到刺激时,细胞表面的钾通道可以通过调节细胞内的离子浓度以及膜电位,在淋巴细胞的激活、增殖、分化和机体整个免疫应答起着重要的调节作用。星斑川鲽(Platichthys stellatus)属海洋经济鱼类中的名贵珍稀物种,具有极高的商业价值。养殖病害频发往往会造成巨大的经济损失,直接制约着海水养殖产业的产量和健康发展。鉴于钾离子通道在机体免疫应答机制中所起的关键作用,深入了解鱼类非特异性免疫应答及调控机制,对于丰富鱼类免疫学的基本内容与基础理论,为海洋鱼类健康养殖提供理论依据和技术指导都有着重要的科学价值与现实意义。目前,离子通道蛋白对免疫系统功能调控的研究已成为国内外专家学者研究的热点。本文以经济鱼类星斑川鲽的脑cDNA为模板,利用RT-PCR和RACE技术获得了星斑川鲽SKCa2基因的全长序列,cDNA长2346bp,其中5’端非编码区153bp,3’端非编码区135bp,开放阅读框2055bp,共编码685个氨基酸。通过构建系统进化树和氨基酸同源性分析,发现星斑川鲽SKCa2与虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)的SKCa2同源性最高,相似性达到了96.3%。使用DAS和protscale服务器对SKCa2进行跨膜区和疏水区预测,发现星斑川鲽SKCa2具有六个跨膜结构域(S1-S6)和一个孔道区(P区)。P区位于S5和S6之间,其上有一段高度保守的特征序列"TXXTXGYG",且有一个离子通道阻断剂—蜂毒明肽(apamin)的作用位点。通过KinasePhos服务器对SKCa2氨基酸的激酶磷酸化位点预测以及其他物种的SKCa2结构分析发现,SKCa2氨基酸序列上存在多个PKA和PKC磷酸化位点。在C末端还存在一个钙调蛋白结合域CaMBD。通过qRT-PCR发现,星斑川鲽的血液、心脏、肝脏、鳃、脾脏、肠、胃、脑、头肾、皮肤和肌肉等组织中均有SKCa2基因表达,并且表达存在组织特异性,在血液和鳃中的表达量较高,其次为心脏、肝脏、头肾、脾脏、皮肤和肌肉,在肠、脑和胃中的表达量相对较低。经LPS感染后,SKCa2在血液、头肾、脾脏、后肠、皮肤和肝脏中的表达量显著上调,表明SKCa2在免疫器官组织执行免疫应答机制的过程中具有重要的调节作用。使用LPS和LPS+Apamin刺激体外培养的星斑川鲽淋巴细胞,研究SKCa2通道对淋巴细胞增殖及呼吸爆发活性的影响。在细胞增殖的研究中发现,LPS+Apamin刺激组的OD570值低于LPS刺激组的OD570值,说明Apamin阻断了SKCa2通道之后,引起淋巴细胞转化水平降低,证实了SKCa2通道在淋巴细胞增殖过程中起着关键作用。在呼吸爆发活性的研究中发现,LPS+Apamin刺激组OD620值与LPS刺激组相比明显下降,说明Apamin刺激后淋巴细胞呼吸爆发强度明显受到了抑制。Apamin阻断SKCa2通道后,引起淋巴细胞呼吸爆发强度减弱,表明SKCa2在淋巴细胞活性氧产生的过程中起着关键作用。以上研究说明SKCa2通道在星斑川鲽中的非特异免疫反应中发挥着重要作用。