普通小麦维生素B含量及全基因组关联分析

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B族维生素是维持机体正常生命活动不可缺少的微量营养物质。由于人类和动物自身不能合成B族维生素,必须从外界摄取,而谷类食物既富含B族维生素成分又是人们重要的主食来源,因此研究B族维生素含量对小麦品质改良和人体健康具有重要意义。本研究通过优化小麦B族维生素的提取方法,构建高效液相色谱方法测定其含量,并结合90K芯片对166份黄淮冬麦区小麦品种进行维生素B1和B2含量的关联分析。主要结果如下:1、依据前人彩色小麦维生素B族提取方法,略作改进并加以优化。通过高峰淀粉酶法和混合酶法两种不同的提取方法相比较,最终选取混合酶法提取。维生素B1和B2的提取液为0.05 M醋酸钠溶液(p H 4.5)、木瓜蛋白酶、还原型谷胱甘肽水溶液、酸性磷酸酶和α-淀粉酶的混合液;维生素B6的提取液是在B1和B2提取液基础上添加乙醛酸和硫酸亚铁。分离色谱柱为Waters XTerra RP18(150×4.6 mm,5μm),配备RF10Axl荧光检测器,色谱柱温度为35℃,样品室温度为4℃,洗脱方式为等度洗脱。维生素B1和B2流动相的A相为甲醇,B相为0.05 M醋酸钠溶液(pH 4.5),二者体积比为30:70;流速为0.7 ml/min;维生素B1检测激发波长/发射波长为366 nm/435 nm,维生素B2检测激发波长/发射波长为422 nm/522 nm。维生素B6流动相的A相为甲醇,B相为0.05 M磷酸二氢钾溶液(含5 mM庚烷磺酸钠),用磷酸调B相pH为2.5,二者体积比为3:97;流速为0.7 ml/min;维生素B6检测激发波长/发射波长为290 nm/395 nm。该方法操作方便,适合大批量样品检测。2、采用18,207个高质量SNP标记对166份黄淮冬麦区的小麦品种维生素B1和B2含量进行关联分析,共检测到24个显著位点。其中17个位点与维生素B1含量显著相关(P<0.001),可解释6.5-10.6%的表型变异;7个位点与维生素B2含量显著相关(P<0.001),可解释6.6-10.5%的表型变异。IWB43809(6AS,0cM)和IWB69903(6AS,13cM)位点均在2个环境中被检测到与维生素B1含量显著相关,可用于分子标记辅助育种,为提高普通小麦维生素B族含量奠定理论基础。
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