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目的：
1.探讨syncytin mRNA及其受体ASCT2 mRNA在正常晚期妊娠患者和不同程度子痫前期患者胎盘中的的表达特点。
2.探讨syncytin蛋白在正常晚期妊娠患者和不同程度子痫前期患者胎盘组织中的表达特点。
3.探讨syncytin mRNA与受体ASCT2 mRNA的相关性。
方法：
1 胎盘标本的采集严格按照乐杰主编的第6版《妇产科学》“子痫前期”诊断标准确诊的孕妇,收集其顺产或剖宫产的胎盘组织。所选三组病例年龄、孕周无统计学意义,无家族遗传病史,分娩前无感染,新生儿无先天畸形。胎盘娩出后30分钟内采集其母面正中(避开钙化区及出血点)大小约1.0cm×1.0cm×1.0cm组织4块,用生理盐水反复漂洗除去血液,干纱布吸收水分,装入冻存管后迅速入液氮罐中速冻,并保存以备用。
2.实时荧光定量RT-PCR(QRT-PCR)检测syncytin mRNA及其受体ASCT2 mRNA在正常晚期妊娠患者和不同程度子痫前期患者胎盘的表达SV Total RNA提取试剂盒提取胎盘组织中总RNA,核酸定量仪检测各标本总RNA浓度,并用2％琼脂糖凝胶电泳鉴定总RNA的完整性。采用一步法实时荧光定量RT-PCR(Taqman探针法)技术检测各标本中syncytin、ASCT2和内参β-actin mRNA的浓度(由标准曲线法计算得出),然后通过内参校正得出各胎盘标本中syncytin、ASCT2的基因相对表达量。
3.Western Blot法检测syncytin蛋白在正常晚期妊娠患者和不同程度子痫前期患者胎盘组织中的表达变化蛋白抽提试剂盒提取胎盘组织中总蛋白,BCA蛋白定量试剂盒定量蛋白浓度,SOS-PAGE电泳,用PVDF膜转膜,一抗二抗封闭后显影和定影,将胶片进行扫描或拍照,用凝胶图象系统分析软件处理目标带的净光密度值。
4.制作病理切片取正常晚期妊娠组和不同程度子痫前期组中的胎盘组织用10％的福尔马林固定24小时,经过洗涤、脱水、浸蜡、包埋、切片与贴片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤后制成病理切片,光镜下观察胎盘组织的结构形态学变化。
5.统计方法
使用SPSS13.0统计学软件包,数据以均数±标准差(-x±s)表示,采用相关性检验；方差齐性时,用单因素方差分析。
结果：
1.QRT-PCR法检测syncytin mRNA及其受体ASCT2 mRNA在胎盘中的的表达
1.1胎盘组织中syncytin mRNA表达的变化：在三组中均有表达,轻度子痫前期患者胎盘组织中syncytin mRNA的相对表达量为0.19l±0.045;重度子痫前期患者胎盘组织中syncytin mRNA的相对表达量为0.118±0.022;正常晚期妊娠患者胎盘组织中syncytin mRNA相对表达量为0.643±0.080,各组子痫前期患者胎盘组织中syncytin mRNA的表达量均比正常妊娠胎盘组织中低,差异具有统计学意义(P<0.05)。但子痫前期患者胎盘各组中的表达差别无显著性意义(P=0.28)。
1.2胎盘组织中ASCT2 mRNA表达的变化：
在三组中均有表达,轻度子痫前期患者胎盘组织ASCT2 mRNA的相对表达量为0.362±0.027;重度子痫前期患者胎盘组织ASCT2 mRNA的相对表达量为0.357±0.019：正常晚期妊娠患者胎盘组织其ASCT2 mRNA相对表达量为0.371±0.025,子痫前期患者的ASCT2 mRNA的表达量均比正常晚期妊娠患者胎盘组织中低,但差异无统计学意义(P>0.05)。
1.3 syncytin mRNA与ASCT2 mRNA的相关性通过相关性检验,syncytin mRNA与ASCT2 mRNA之间无线性相关。
2.Western Blot法检测在三组中均有表达,轻度子痫前期患者胎盘组织中syncytin蛋白的相对表达量为58.98±24.68;重度子痫前期患者胎盘组织中syncytin蛋白的相对表达量为45.76±24.68;正常晚期妊娠患者胎盘组织中syncytin蛋白相对表达量为94.92±38.38;子痫前期胎盘患者组织中syncytin蛋白的表达量均比正常晚期妊娠患者胎盘组织中低,有显著性意义(P<0.05)。轻度子痫前期患者胎盘的表达与重度子痫前期患者胎盘的表达差别无显著性意义(P>0.05)。结果与实时荧光定量RT-PCR的表达一致。
3.HE染色后光镜下观察胎盘组织结构变化在子痫前期胎盘组织中,细胞滋养细胞增生,合体滋养细胞结节增多,纤维素样坏死的数目随着疾病的加重逐渐增多；且与病情的严重程度呈平行关系,重度子痫前期患者胎盘形态学病理变化最明显。
结论：
1.syncytin mRNA与syncytin蛋白表达下降可反应子痫前期的轻重程度,可能与子痫前期的病因及病理生理有关。
2.ASCT2 mRNA在三组中均有表达,在三组中的改变无显著性意义,表示ASCT2与子痫前期的发病无明显的关系。
3.Syncytin.mRNA与ASCT2 mRNA之间无线性相关,提示子痫前期中syncytin在转录水平已经受到影响而下调。