【摘 要】
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第一部分 目的:制备培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,并用利多卡因验证该模型的可靠性.方法:取新生SD大鼠心室肌,培养出原代细胞用于实验.缺氧前用无血清高糖DMEM(Dubiccos Mo
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第一部分 目的:制备培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,并用利多卡因验证该模型的可靠性.方法:取新生SD大鼠心室肌,培养出原代细胞用于实验.缺氧前用无血清高糖DMEM(Dubiccos Modified Eagle Medium)孵育细胞12h.按孔将细胞随机分为五组.C组:正常对照组;H/R组:缺氧4h/复氧3h;L<,40>、L<,80>和L<,120>组:分别用利多卡因40μmol/L、80μmol/L和120μmol/L预处理2h,再缺氧4h/复氧3h.用生化比色法测定复氧3h时培养基中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量.第二部分 目的:观察丙泊酚对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞培养基中LDH含量、细胞原癌基因c-fos表达产物Fos蛋白和热休克蛋白70(heat shock protein,HSP70)的影响.方法:将培养细胞按孔随机分为六组.C组:正常对照组;H/R组:缺氧/复氧组;I、P<,25>、P<,50>和P<,100>组:同H/R组缺氧/复氧,在缺氧前10min开始分别将10﹪脂肪乳剂、丙泊酚25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L加入培养基中.用生化比色法测定复氧3h时培养基中LDH含量,免疫组化法检测心肌细胞复氧2h时Fos和复氧4h时HSP70的表达水平.第三部分 目的:观察丙泊酚对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞的保护效应是否与JNK(c-Jun N-amino-terminal protein kinase)信号通路有关.方法:按孔将细胞随机分为八组,分别为H/R、P<,25>、P<,50>、P<,100>、H/R+AN、P<,25>+AN、P<,50>+AN和P<,100>+AN组,细胞缺氧/复氧和丙泊酚处理同第二部分.除H/R+AN组从缺氧前10min开始加入0.2μmol/L茴香霉素(anisomycin);后三组除在加入不同浓度丙泊酚的同时加入0.2μmol/L茴香霉素外,余同第二部分.用免疫组化法检测复氧2h时Fos和复氧4h时HSP70的表达.
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