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目的 (1) 建立毒鼠强灌胃致死的动物模型和死后再分布研究动物模型;观察犬的毒鼠强中毒表现和死后各组织脏器的病理变化; (2) 研究毒鼠强在灌胃死亡犬体内的分布、死后再分布规律,为毒鼠强中毒案件的法医学鉴定提供科学依据; (3) 建立毒鼠强死后弥散研究动物模型,研究毒鼠强在犬体内的死后弥散特点,探讨毒鼠强死后再分布的机制。 方法 1.动物模型及检材提取 1.1 死后分布模型 取犬6只,将犬左侧卧位固定于犬台,按3倍LD50剂量(0.46mg/kg体重)(根据人毒鼠强LD50(0.1mg/kg)按体型系数推算),用米汤汁稀释至0.1mg/ml灌胃,等体积米汤汁冲洗。观察其生命体征变化,心跳、呼吸和角膜反射全部消失后,迅速解剖动物,采集心、肺、肝、脾、肾、胃、脑、胆汁、尿、心血、周围血和肌肉等组织脏器和体液,检测其中毒鼠强含量,每只犬的检材在24h内检测完毕。 1.2 死后再分布模型 取犬9只,随机分为常温实验组(3只)、4℃实验组(3只)和-20℃实验组(3只)。染毒方法同死后分布模型。分别置于常温、4℃和-20℃保存,于死后0、2、4、8、24、48和72h分别取心血、周围血、肝脏、大脑和肌肉,检测其中毒鼠强含量。死后72h解剖犬,提取心、肝、脾、肺、肾、脑和心血等检材,检测其中毒鼠强含量。 1.3 死后弥散模型 取犬6只,随机分为灌胃后去胃组(3只)和处死后灌胃(3只)组。 处死后灌胃组 将犬左侧位固定于犬台,置胃管后,夹闭气管,待呼吸、心跳和角膜反射消失后,按3倍LD50剂量(0.46mg/kg体重)(根据人毒鼠强LD50(0.1mg/kg)按体型系数推算),用米汤汁稀释至0.1mg/ml灌胃,等体积米汤汁冲洗。置于室温下,于灌胃后0、2、4、8、24和48不同时间点取心血,每次取材后将肌肉和皮肤逐层缝合,尽量保持机体的完整性。死后72h解剖犬,提取心、肝、脾、肺、肾、脑和心血等检材,检测其中毒鼠强含量。 灌胃后去胃组 染毒死方法同死后分布模型。当犬死亡后立即开腹,结扎幽门和贲门,去除胃,将肌肉和皮肤逐层缝合,置于室温下,检材提取和检测同处死后灌胃实验组。 2.病理检材处理 实验犬角膜反射、呼吸和心跳全部消失时,迅速解剖动物,取心、肝、脾、肺、肾、脑、胃和肌肉等组织,用4%甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察。 3.毒鼠强的检测 组织匀浆后,碱化处理,苯萃取,气相色谱/质谱联用检测,利用毒鼠强气相色谱tr和质谱特征离子峰定性,内标法和工作曲线法定量。