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二恶英及其类似化合物是一类广泛存在于环境中有毒的卤代芳香烃,对人和动物体具有肝毒性、免疫毒性、致癌等毒性.故监测环境中二恶英意义重大.由于二恶英的仪器检测需要昂贵的仪器,不能用于环境和食品中二恶英的日常监控.生物检测尤其是表达分析系统具有快捷、简便、经济的特点,正在成为环境和食品中二恶英监测的重要手段.为了获得具有二恶英反应性的含报告基因的表达载体来检测二恶英及其类似化合物,该文根据二恶英分子作用机理和应用分子生物学技术构建了7个表达载体.然后,该文用Polybrene法将上述构建的7个表达载体转染大鼠肝癌细胞H4Ⅱ E.通过瞬时转染,在转染了载体pG-CMV-DRE(2)和pG-SV-DRE(2)的细胞体内观察到有报告基因绿色荧光蛋白表达.通过对质粒pG-CMV-DRE(2)进行瞬时转染试验,该文初步优化了质粒的量、转染试剂的量以及孵育的时间之间的关系并测定了DMSO最佳工作浓度.然后,用载体pG-CMV-DRE(2)、pG-SV-DRE(2)和不同比例的pBSK-MAR共转染细胞,进行稳定转染.转染了表达载体的细胞在500μg/mLG418的压力下生长一个月,形成稳定克隆株,其中转染了载体pG-CMV-DRE(2)的细胞形成60多个稳定克隆株,pG-SV-DRE(2)形成50个克隆.用滤纸法,将细胞克隆转入24孔板生长.待细胞生长汇合度达到85%以上,消化细胞,用3-MC或TCDD诱导筛选克隆.结果发现克隆HECMV002经化合物诱导后24h,相对荧光强度是DMSO对照组的1.5倍.将冻存后细胞株HECMV002复苏,准备进行试验绘制TCDD的反应曲线,但由于种种原因,结果细胞死亡.因此,要得到实用的、能用于二恶英及类似物生物检测的细胞株需要进一步扩大稳定转染,得到更多的细胞株以供筛选.