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目的:从分子水平上探讨红霉素(EM)的抗炎作用机制,为临床防治慢性阻塞性肺疾病(COPD)提供新的思路。 方法:体外培养人支气管上皮细胞(16HBE),将细胞随机分为8组,先加入红霉素干预,后加入肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激。分组如下:1.空白对照组;2.TNF-α(20ng/ml,16h);3.EM(0.3ug/ml,24h)+TNF-α(20ng/ml,16h);4.EM(3ug/ml,24h)+TNF-α(20ng/ml,16h);5.EM(30ug/ml,24h)+TNF-α(20ng/ml,16h);6.EM(0.3ug/ml,48h)+TNF-α(20ng/ml,16h);7.EM(3ug/ml,48h)+TNF-α(20ng/ml,16h);8.EM(30ug/ml,48h)+TNF-α(20ng/ml,16h)。然后收集各组细胞分别提取RNA及核蛋白,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测白介素-8(IL-8)mRNA、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达,并应用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测转录因子核因子-κB(NF-κB)的活性。 结果:EMSA结果显示,用前炎因子TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE)后,细胞内NF-κB表达增高;RT-PCR结果显示细胞IL-8mRNA、ICAM-1mRNA表达增高。先加入不同浓度及作用时间的红霉素,后加入前炎因子TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE),EMSA结果显示各组细胞NF-κB表达均降低,且提示有随着红霉素浓度增加,作用时间延长,NF-κB表达受抑制愈明显的趋势,但随着红霉素浓度增加及作用时间延长到一定的范围,NF-κB表达受抑制差别不明显。RT-PCR结果显示各组细胞IL-8mRNA表达均降低,但其降低的水平与红霉素作用浓度及时间无明显关系;各组细胞ICAM-1mRNA表达均降低,且提示有随着红霉素浓度增加,作用时间延长,ICAM-1mRNA表达受抑制越明显的趋势。 结论:1.前炎因子TNF-α能激活人支气管上皮细胞NF-κB,而NF-κB可能参与了IL-8基因、ICAM-1基因的表达调控,使其表达增高,促 进炎症的发生发展,在炎症进程中发挥着重要作用。2.红霉素能抑制人支气管上皮细胞NF-KB的激活水平,且可能通过抑制NF一B的激活水平,下调与炎症密切相关的细胞因子几一8、ICAM一1的基因表达,从而抑制炎症进程,这可能是红霉素的抗炎作用机制之一。