论文部分内容阅读
目的 研究体外卵泡抑素样蛋白1 (FSTL1)刺激鼻咽癌(NPC)患者树突状细胞(DC),诱导成熟后并与自体淋巴细胞混合培养,检测其细胞上清液中IL-12、IL-4和细胞总蛋白中磷酸化的信号转导和转录激活子4(P-STAT4)及磷酸化的信号转导和转录激活子6 (P-STAT6)的表达量,研究FSTL1对鼻咽癌患者树突状和淋巴细胞免疫效能的作用,并进一步探讨其作用的可能机理。研究方法(1) 等密度离心法分离出33例鼻咽癌患者和18例健康志愿者外周血25ml的单个核细胞(PBMC)和血清,贴壁法分离单核细胞与淋巴细胞,血清-20℃冻存备用。淋巴细胞维持培养备用。(2)体外使用肿瘤坏死因子(终浓度1000U/ml)、白细胞介素-4(终浓度为500U/ml)和集落刺激因子(终浓度为1000U/ml)刺激培养单核细胞,第5天DC分成实验组和对照组：实验组加入FSTL1,即FSTLl+DC组；对照不加FSTL1,即DC组。第8天收集成熟DC。(3)成熟DC呈递抗原肽LMP2给自体淋巴细胞,混合培养,第12天收集细胞上清液,提取裂解后细胞的总蛋白,通过ELISA检测血清FSTL1、IL-12和IL-4浓度和细胞上清液IL-12、IL-4浓度,Western Blotting检测STAT4和STAT6磷酸化的表达。结果1成功培养出形态多样,且突起大小和长短都不一样的典型树突状突起的细胞。2酶联免疫吸附实验结果2.1 NPC和健康人血清：①鼻咽癌患者血清和健康人血清FSTL1、IL-12及IL-4浓度差异无统计学意义(P>0.05)。②FSTLl与IL-12呈正相关关系,与IL-4呈正负相关关系,IL-4与IL-12成负相关关系,但P值均大于0.05,无统计学意义。2.2鼻咽癌患者和健康人细胞上清液：①鼻咽癌组：DC组和DC+FSTL1组分泌IL-12浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)；IL-4浓度比较,两组数据差异有统计学意义(P=0.029), DC+FSTL1组浓度高于DC组。②健康人对照组：DC组和DC+FSTL1组分泌IL-12浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)；IL-4浓度比较,两组数据差异显著(P=0.003), DC+FSTL1组明显高于DC组。③鼻咽癌患者和健康人的DC+FSTL1组相比较：IL-12浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05),IL-4浓度比较,差异显著(P=0.001),健康人DC+FSTL1组远高于鼻咽癌组。④鼻咽癌患者和健康人DC组相比较：IL-4和IL-12浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。⑤NPC实验组细胞上清液IL-12和IL-4浓度之间的Pearson相关系数为0.21,P>0.05,差异无统计学意义；正常实验组细胞上清液IL-12和IL-4浓度之间的Pearson相关系数为0.45,P>0.05,差异无统计学意义。3 Western Blotting结果①鼻咽癌患者组：DC组和DC+FSTL1组比较,P-STAT4半定量表达,差异非常显著(P=0.000), DC+FSTL1组远远高于DC组；p-STAT6半定量表达,差异显著(P=0.001), DC+FSTL1组远高于DC组。②健康人对照组：单独DC组和DC+FSTL1组比较,P-STAT4半定量表达,差异显著(P=0.008); P-STAT6半定量表达,差异显著(P=0.003), DC+FSTL1组明显高于DC组。③鼻咽癌患者和健康人DC+FSTL1组相比较,P-STAT4半定量表达,差异显著(P=0.001),鼻咽癌患者远远低于健康人；P-STAT6半定量表达,差异非常显著(P=0.005),鼻咽癌患者明显低于健康人。④鼻咽癌患者和健康人DC组相比较,P-STAT4半定量表达,差异无统计学意义(P=0.145); P-STAT6半定量表达,差异显著(P=0.005),健康人DC组明显高于鼻咽癌DC组。结论 DC受FSTLl刺激后,其递呈活性提高,使淋巴细胞分泌的IL-4增加,影响STAT4和STAT6的磷酸化水平,从而提高淋巴细胞的肿瘤免疫功能。