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第一部分MicroRNA-145和血管内皮生长因子(VEGF)在人骨肉瘤组织中的表达变化目的：探讨人骨肉瘤组织microRNA-145(miRNA-145)和VEGF表达的变化及其临床意义。方法：临床上收集华中科技大学附属协和医院28例人骨肉瘤标本,用实时荧光定量RT-PCR的方法检测28例骨肉瘤标本中骨肉瘤组织,肿瘤边缘组织,正常组织中miRNA-145的表达变化；用实时荧光定量RT-PCR以及免疫组织化学的方法检测28例骨肉瘤标本中骨肉瘤组织,肿瘤边缘组织,正常组织中VEGF的表达变化。结果：28例标本中25例骨肉瘤组织中miRNA-145的表达较正常组织明显降低,肿瘤边缘组织中的表达位于两者之间,有统计学意义(P<0.05)。28例标本中所有骨肉瘤组织中VEGF的表达较正常组织中明显增高,肿瘤边缘组织中的表达位于两者之间,有统计学意义(P<0.05)。结论：骨肉瘤组织中的miRNA-145的表达下调,VEGF的表达上调,miRNA-145和VEGF参与骨肉瘤的发生发展,两者之间可能存在着联系。第二部分MicroRNA-145对骨肉瘤细胞生物学行为影响的体外实验研究目的：研究microRNA-145(miRNA-145)对于骨肉瘤细胞生物学行为包括细胞增殖、细胞周期、凋亡、粘附侵袭以及促血管形成能力的影响。方法：用脂质体法将miRNA-145模拟物瞬时转染入人骨肉瘤细胞(MG63)中,实验设置空白对照组、阴性对照转染组、miRNA-145转染组三组,转染后荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量RT-PCR检测各组细胞miRNA-145的表达,蛋白质印迹法Western Blot检测各组细胞VEGF的表达,MTT增殖实验检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期及细胞凋亡率,细胞粘附实验检测各组细胞的粘附能力,Transwell细胞侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力,小管形成实验检测各组细胞的促进血管生成能力。结果：MiRNA-145转染组中miRNA-145的表达明显增高,VEGF的表达明显降低,有统计学意义(P<0.05)；MiRNA-145转染组中肿瘤细胞增殖速度明显下降,细胞周期停止在G1期之前,凋亡率增高,细胞粘附力和侵袭力明显降低,促进血管生成能力明显降低,有统计学意义(P<0.05)。结论：MiRNA-145可以有效的抑制骨肉瘤细胞的增殖、粘附、侵袭和促血管形成能力,促进细胞凋亡,miRNA-145是一种骨肉瘤抑制基因,miRNA-145和VEGF之间可能存在相关调控关系。第三部分MicroRNA-145调控骨肉瘤中血管内皮生长因子(VEGF)表达的实验研究目的：探讨骨肉瘤中microRNA-145(miRNA-145)对于VEGF表达的相关调控关系。方法：采用荧光素酶报告基因检测方法,构建含有VEGF-3’UTR的表达质粒(包括野生型和突变体),将含有VEGF-3’UTR的质粒与miRNA-145共转染入人骨肉瘤细胞中,实验分为三组：单纯质粒转染组,含有VEGF-3’UTR质粒和miRNA-145阴性对照共转染组,含有VEGF-3’UTR和miRNA-145共转染组,转染后48小时监测各组细胞荧光素酶的表达变化。结果：含有VEGF-3’UTR的表达质粒(野生型)与miRNA-145共转染组荧光素酶的表达较其他两组明显降低,有统计学意义(P<0.05),而含有VEGF-3’UTR突变体的表达质粒与miRNA-145共转染组荧光素酶的表达与其他两组相比较无明显变化(P>0.05)。结论：MiRNA-145可以与VEGF的3’-UTR不完全互补结合,下调骨肉瘤中VEGF的表达,VEGF是miRNA-145的一个靶基因。第四部分MicroRNA-145对骨肉瘤细胞生物学行为影响的体内实验研究目的：研究microRNA-145(miRNA-145)对于裸鼠体内骨肉瘤细胞生长和微血管形成的影响。方法：Balb/c裸小鼠16只,随机分为对照组和实验组,每组8只,对照组用未转染的MG63细胞建立骨肉瘤模型,实验组用转染miRNA-145模拟物的MG63细胞建立骨肉瘤模型。荷瘤裸鼠饲养4周,比较两组成瘤率,瘤体大小,瘤体重量,用免疫组织化学的检测方法检测两组裸鼠瘤体Ⅷ因子和VEGF的表达,并计算微血管密度(MVD)。结果：对照组裸鼠成瘤率87.5%,实验组裸鼠成瘤率37.5%,实验组裸鼠形成肿瘤大小,重量明显低于对照组,实验组形成肿瘤VEGF的表达较对照组明显降低,MVD计数明显降低,有统计学意义(P<0.05)。结论：MiRNA-145可以抑制荷瘤裸鼠的成瘤率,抑制肿瘤的体内生长和肿瘤血管的形成。