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目的:观察肝素对肺上皮细胞株(A549细胞) EGFR活性及表达MUC5AC的影响及探讨可能的机制。方法:(1)体外培养人气道上皮细胞系A549细胞。(2)实验分为五组:对照组(无干预无刺激);模型组(PMA刺激),用10ng/ml的PMA刺激A549细胞1小时;干预组(G50:PMA和肝素50U/ml,G150: PMA和肝素150u/ml,G450: PMA和肝素450u/ml),干预组在PMA刺激前用不同浓度肝素预处理半小时。(3)各组处理24小时后用MTT法测的OD值分析各组药物对细胞活力的影响。(4)各组孵育24h后,采用RT-PCR检测各组细胞中MUC5AC mRNA含量及ELISA检测培养上清中MUC5AC;Western印迹分析磷酸化表皮生长因子(p-EGFR)蛋白水平。结果:(1)模型组和各干预组24小时后用MTT法测的OD值与对照组比较差异均无统计意义(P均>0.05),说明用于实验的不同浓度肝素和/或PMA对A549细胞的生长无影响。(2)模型组上清液中的MUC5AC蛋白含量与正常对照组相比有显著增高(为p<0.01);给予肝素干预后,明显降低了PMA诱导A549细胞黏蛋白高水平的分泌(与刺激组相比分别p<0.01 p<0.001,p<0.001),且呈剂量依赖性(干预组间相比p<0.05)。(3)PMA刺激A549细胞24h后MUC5ACmRNA的表达水平明显增强,与对照组相比(p<0.01)差别有统计学意义。给予肝素干预后,明显降低了MUC5ACmRNA表达水平(与刺激组相比分别p<0.01p<0.001,p<0.001),且呈剂量依赖性(干预组间相比p<0.05)。(4)在模型组,p-EGFR蛋白含量明显升高(与对照组相比,P〈0.02〉;而G50干预组p-EGFR蛋白含量较模型组有降低,但差别无统计学意义(与模型组相比,P>0.05);G150和G450干预组较模型组有明显降低,且差别有统计学意义(与模型组相比分别p<0.05, p<0.01)。结论:(1)PMA显著刺激气道上皮细胞黏蛋白MUC5AC基因转录及蛋白合成分泌增加,还有p-EGFR蛋白含量的显著增高。(2)肝素明显抑制PMA诱导MUC5AC基因转录及蛋白合成分泌增加,且呈剂量依赖性。还发现除G50干预组外另两种肝素浓度可抑制PMA诱导EGFR活性(。3)有大量研究已证明PMA是有力的促黏液5AC分泌剂,其核心机制:激活表皮生长因子受体的信号通路,故可得出大剂量肝素通过抑制EGFR活性干预PMA诱导的MUC5AC基因表达的。(4)肝素经过抗凝活性部分的结构修饰可大大降低抗凝活性;充分利用肝素的非抗凝活性,修饰后的肝素有可能作为一种有价值的抗炎、抗黏液分泌药物。