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目的hClock-(35-47)为人类节律基因Clock的DNA结合结构域，对细胞膜和血脑屏障具有穿膜作用。Bcl-2和Bax分别是Bcl-2家族中最主要的抑制凋亡和促进凋亡蛋白。在多数肿瘤中，Bcl-2表达水平升高，而Bax表达下降。上调Bcl-2或下调Bax能抑制多种因素诱导的多种肿瘤细胞凋亡。反之，下调Bcl-2或上调Bax则促进多种肿瘤细胞凋亡。肿瘤的Bcl-2／Bax表达比例与其发生和发展密切相关。Elisabeth Peherstorfer等人发现了Bax-(55-77)与全序列蛋白有相同的作用，说明该肽段为其功能位点。但是他们采用的是细胞内微注射的方法，该方法不利用普及和应用于临床。本实验通过基因工程技术，合成hClock-(35-47)和Bax-(55-77)的融合蛋白。将hClock-(35-47)的穿膜作用与Bax-(55-77)的抑制肿瘤的作用结合，为研究全新的抗癌药物提供实验基础。方法化学合成hClock-(35-47)_Bax-(55-77)全长DNA序列，重组入pET-32a+表达载体中，测序鉴定后转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株，构建好重组体的表达菌株。IPTG诱导并优化表达后，以NTA—Ni亲合层析进行分离纯化，及SDS—PAGE和Western bloting对其相对分子质量，免疫反应性等进行鉴定。结果构建了hClock-(35-47)_Bax-(55-77)融合蛋白的原核表达载体，成功表达和纯化了hClock-(35-47)_Bax-(55-77)，SDS-PAGE结果显示纯化产物为分子量约23kD的单一蛋白带，Western blotting鉴定结果显示，纯化产物与抗His-tag多克隆抗体有较强的特异性反应。。结论hClock-(35-47)_Bax-(55-77)融合蛋白可以用原核表达的方法大量获得，并通过亲和层析纯化达到较好的纯度，为下一步的应用提供基础。