背景与目的:近些年来,非中性粒细胞缺乏宿主肺曲霉菌病的发病率持续增加,患有此类型疾病尤其是侵袭性肺曲霉菌病的患者的临床预后往往不佳,高死亡率以及预后不良事件发生的背后,也提示临床上对于此类疾病的早期识别与诊断能力的不足。另一方面,对于该类疾病的早期诊断与治疗能极大提高患者的生存率以及改善患者的预后。所以针对此类疾病,急需寻找新的可以快速并且能进行精确诊断的检测方法以及诊治策略。在呼吸道样本的曲霉菌检测方面,以qPCR技术为代表的新型分子检测技术在近些年来显示出了较高的临床应用价值,但由于此类检测技术对待检样本的类型以及靶标的底物浓度等要求较高,以及不能对待检样本内的目的靶标进行精准定量等原因,该技术在临床上的应用也受到了一定的限制。近年来,随着微液滴数字PCR技术在微生物检测领域的广泛应用,对于病原微生物的检测也迈入了新的篇章。研究结果提示,与qPCR相比,微液滴数字PCR在对相关临床样本的微生物病原体检测方面具有更高的灵敏度和准确性,并且在复杂样本的检测方面,该技术具有更好的应用前景。但是,目前尚无已发表研究评价该技术在非中性粒细胞缺乏宿主肺曲霉菌病方面的临床应用价值。所以,本实验将以临床实际需求出发,结合相关病例回顾性分析结果以及前瞻性基础实验的研究结果,来评价微液滴数字PCR技术以及非分子学诊断方法如GM实验、G实验在非中性粒细胞缺乏宿主肺曲霉菌病方面的应用价值,以期为实现对该类患者早诊早治的目标提供新的具有实践价值与意义的方案。方法:本研究的第一部分,采用回顾性病例分析的方法对肺曲霉菌病患者的临床资料进行分析,并且评价可能导致该类患者预后不良的因素,以及比较不同类型样本进行GM实验和G实验对于该类疾病的诊断价值。本研究的第二以及第三部分,将对收集的肺泡灌洗液以及痰液样本进行微液滴数字PCR的检测,并且对收集的肺泡灌洗液样本进行GM实验和G实验。根据微液滴数字PCR对于呼吸道样本中曲霉菌DNA数量的检测结果,以及其他非分子学诊断方法的检测结果,综合评价分析微液滴数字PCR技术以及非分子学诊断方法如GM实验和G实验对非中性粒细胞缺乏宿主肺曲霉菌病的临床应用价值。结果:(1)回顾性病例分析的结果显示,进入呼吸重症监护室治疗的非中性粒细胞缺乏的侵袭性曲霉菌病患者更易合并COPD(P=0.011)以及甲型流感(P=0.033),且90天内死亡的患者更易合并肺癌(P=0.033)以及甲型流感(P=0.033)。合并侵袭性肺曲霉菌的非中性粒细胞缺乏的呼吸重症监护室患者30天(P=0.03)以及90天(P<0.01)的死亡率要显著高于在普通病房进行治疗的患者。以上患者合并肺部基础疾病种类的多少为患者疾病诊断后30天(95%1.328-11.232)以及90天(95%CI,1.129-4.410)死亡的独立危险因素。对于不用类型的肺曲霉菌病,肺泡灌洗液样本的GM实验以及G实验的检测阳性率均高于血液样本。(2)对肺泡灌洗液样本的研究结果显示,微液滴数字PCR技术对非中性粒细胞缺乏宿主肺曲霉菌病患者肺泡灌洗液样本中曲霉菌DNA显示出了较高的检出能力(敏感性80%),并且将该检测技术的诊断切点值与GM实验的诊断切点值进行组合后所拟定的诊断策略对此类患者侵袭性肺曲霉菌病的诊断效能最高(敏感度为87.5%,特异度98.99%,阳性预测值87.5%阴性预测值98.99%,诊断比值比95%CI为38.67-12170.79)。在肺曲霉菌病患者组,肺泡灌洗液微液滴数字PCR的曲霉菌DNA检出数量与GM实验的检测结果呈显著正相关(r=0.736,P=0.010)。非肺曲霉菌病组人群中呼吸道样本曲霉菌DNA检出者为27人(26.4%)。(3)对痰液样本的研究结果显示,与传统培养方法相比(灵敏度33.33%),微液滴数字PCR技术对痰液样本的曲霉菌DNA显示出了较高的检出能力(灵敏度83.33%)。死亡组的侵袭性肺曲霉菌病患者,其痰液的微液滴数字PCR检出的曲霉菌DNA数量显著高于非死亡组(P=0.034)。微液滴数字PCR检出的痰液曲霉菌DNA数量可以对接受抗真菌药物治疗的肺曲霉菌病患者的治疗效果起到侧面提示的作用。结论:1.非中性粒细胞缺乏的侵袭性肺曲霉菌病患者的死亡风险与其肺部基础疾病的复杂程度存在高度的相关性,对于此类型的肺曲霉菌病患者,使用肺泡灌洗液进行GM实验以及G实验检测的阳性率要高于血液样本。2.微液滴数字PCR技术对肺泡灌洗液以及痰液样本中的曲霉菌DNA具有较好的检出能力,对于此检测方法进行合理的诊断切点值划定,并且与肺泡灌洗液GM实验进行联合检测,可以提高对于非中性粒细胞缺乏宿主肺曲霉菌病的诊断能力。3.对呼吸道样本进行微液滴数字PCR检测将有助于对非中性粒细胞缺乏的肺曲霉菌病患者进行治疗以及预后的监测,并且可能提升对呼吸道曲霉定植患者的识别能力。