口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cellcarcinoma,OSCC）是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,占口腔恶性肿瘤的90%,局部复发和颈部淋巴结转移是其致死的主要原因。口腔鳞癌的发病及侵袭机制尚不十分明确,因此为早期诊断和制定个体化治疗策略带来困难。随着表观遗传学研究的进展,近年来DNA分子的甲基化和羟甲基化逐渐成为目前肿瘤表观遗传研究的焦点,5-羟甲基胞嘧啶（5-Hydroxymethylcytosine,5hmC）被认为是活性DNA去甲基化的中间体,除了具有DNA脱甲基作用外,还具有调节与发育、多能性和RNA剪接过程有关的基因的作用,与肿瘤的恶性转化过程有关;十^十一易位双加氧酶（Ten-Eleven Translocation,TET）利用Fe²⁺和α-酮戊二酸（α-KG）介导5-甲基胞嘧啶（5-Methylcytosine,5mC）羟化为5hmC,是导活性DNA去甲基化的主要限制因子。研究显示,在不同的肿瘤类型中,有不同的TET家族成员被报道为肿瘤抑制因子,5hmC被发现在多种实体肿瘤中缺失,是肿瘤识别和进展的生物标志物,但在口腔鳞癌中的研究相对较少。目的:本课题在检测5hmC在口腔鳞癌中的表达基础上,分析了5hmC表达水平与临床参数的相关性;并进一步在细胞水平探讨了TET2对5hmC表达的调控机制,及对肿瘤表型的影响;探讨DNA去甲基化药物对口腔鳞癌的抑制作用。方法:1、收集临床口腔鳞状细胞癌标本,进行免疫组化染色检测5hmC表达水平;分析5hmC表达水平与病灶大小、病理分级、淋巴结转移、临床分期等的相关性及意义;2、检测5hmC和TET2在4NQO诱导小鼠舌鳞状细胞癌动物模型中的不同阶段组织标本中的表达;3、通过构建过表达TET2病毒并转染口腔鳞癌细胞系,检测其对5hmC表达的影响,及肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化;4、选择DNA甲基转移酶抑制剂5氮胞苷（5-azacytidine,5aza）体外作用于口腔鳞癌细胞,通过蛋白印迹检测TET2和5hmC表达的促进作用,RT-PCR检测TET1、TET2、TET3的mRNA水平。结果:1、免疫组化的结果显示5hmC鳞状细胞癌组织与正常舌体组织中的表达有显著差异（P=0.0084）;5hmC的表达与患者病理分级（P=0.0239）、颈淋巴结转移（P=0.0041）显著相关;结合临床随访资料,对患者生存率进行分析,发现5hmC高表达的患者与5hmC低表达的患者相比,总体生存率、无疾病生存率和疾病特异性生存显著相关（P=0.0210,0.0313,0.0415）。2、在4NQO诱导的小鼠舌鳞状细胞癌动物模型中5hmC和TET2的表达随着癌病变进展的不同阶段逐渐减弱;3、口腔鳞癌细胞过表达TET2后明显促进了5hmC的表达水平,癌细胞增殖、迁移、侵袭和平板克隆形成能力被抑制;4、5aza干预后TET2基因和5hmC表达水平显著上调;药物干预组细胞TET蛋白家族TET1、TET2、TET3mRNA水平均显著升高。结论:5hmC是口腔鳞癌发生进展过程中潜在的表观遗传标志物,可以通过抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭等参与肿瘤的发生发展;TET2基因是5hmC的关键限制因子,调控5hmC的表达水平;5-氮胞苷（5aza）能升高口腔鳞癌细胞中TET2的表达水平,导致5hmC的表达水平升高,从而抑制口腔鳞癌的进展,提示为口腔鳞癌治疗提供了新的治疗策略。