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该课题是以关木通中含有的马兜铃酸作为剂量依据,在研究中同时采用了含有相当量的马兜铃酸的关木通提取物和精制马兜铃总酸,两者对比进行研究,从而进一步确定了关木通的急性毒性、慢性毒性以及致肿瘤性均与马兜铃酸密切相关,同时还分别研究了关木通致急性肾脏毒性、慢性肾脏毒性以及致肿瘤性过程中马兜铃酸摄入的量-毒、时-毒关系,以希望找出临床应用中的安全剂量和安全用药时间.该研究得到国家中医药管理局重大课题项目基金资助(课题号:国中医药科2001ZDZX04).一.马兜铃科关木通及木通科三叶木通、五叶木通对小鼠的急性毒性研究通过比较研究关木通和关木通马兜铃总酸对小鼠的急性毒性试验,发现给小鼠单次灌胃关木通提取物或精制的关木通马兜铃总酸二者所致的毒性特征一致、死亡时程相似,以马兜铃酸计,两者对小鼠的LD50值相近,说明关木通提取物单次给药的致死作用与相当剂量的马兜铃总酸的致死作用相近,表明关木通急性毒性主要是由马兜铃酸引起,动物死亡率与马兜铃酸呈明显的剂量反应关系.二.关木通及关木通马兜铃总酸的急性肾毒性研究给小鼠单次灌胃不同剂量的关木通,同时以精制的关木通马兜铃总酸作对照,观察对小鼠的肾损害作用.三.关木通及关木通马兜铃酸的慢性肾损害研究采用2000版《药典》中推荐的人日用药剂量等倍(按体表面积折算后与《药典》中推荐的人日用药剂量相等)、5倍、10倍、20倍的关木通提取物,同时用与关木通20倍剂量组马兜铃总酸含量相当的精制关木通马兜铃总酸作为对照,给大鼠灌胃,隔周给药7天,给药试验期为26周,并停药观察4周.检查尿量、尿比重及尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β<,2>-微球蛋白(β<,2>-MG)、蛋白、葡萄糖和电解质含量,采用免疫组织化学法观察肾脏TGF β1蛋白表达和肾小球基底膜抗原与抗体复合物,采用HE和Masson染色两种方法观察了肾脏组织形态学改变.四.关木通和关木通马兜铃总酸的致突变性和致肿瘤作用研究在小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中,关木通提取物的剂量为1/4×、1/2×和1×LD<,50>(小鼠)三个剂量(折合成Aas为13、27和53mg/kg),同时以与关木通提取物LD<,50>相当的马兜铃总酸作为对照,观察给药后24小时小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率.结果显示,关木通提取物的1/4 LD<,50>、LD<,50>组及关木通马兜铃总酸组,引起嗜多染红细胞微核发生率轻度但有统计学意义的增加,马兜铃总酸组的微核发生率明显高于关木通提取物各组.