姜黄素下调mir-186*表达促进人肺腺癌细胞A549和A549/DDP凋亡的研究

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背景与目的:姜黄素是从姜黄科植物的根茎中提取的一种天然化合物。体内、外的临床研究表明其具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种作用。miRNA-186*(mir-186*)是通过microarray芯片技术筛选出的同时在人肺腺癌A549和A549/DDP细胞中明显差异表达的基因。本研究旨在阐明姜黄素可能通过调控mir-186*的表达而促进A549和A549/DDP细胞凋亡。方法:1.用姜黄素处理A549和A549/DDP细胞并以DMSO处理作为对照。2. microarray芯片技术检测A549和A549/DDP细胞中microRNAs(miRNAs)表达量的变化。3.筛选出A549和A549/DDP细胞中明显差异表达的miRNAs。4.实时定量PCR验证从microarray芯片中筛选出来的明显差异表达的miRNAs。5.①通过miRanda在线数据库预测和筛选A549细胞中明显差异表达的miRNA下游可能的靶基因。②Western-blot法检测其下游靶基因蛋白的表达量;流式细胞仪法检测A549细胞中明显差异表达的miRNA调控的细胞凋亡。③流式细胞仪法检测A549/DDP细胞中明显差异表达的miRNA调控的细胞凋亡;MTT法检测A549/DDP细胞存活率。结果:1. microarray芯片技术结果显示:与DMSO对照组相比,姜黄素处理后,A549和A549/DDP细胞中mir-186*的表达都明显下调。2.实时定量PCR验证了microarray芯片检测的上述结果。3.①通过miRanda数据库预测到的mir-186*下游的靶基因共有700多个,经过对基因功能进行分类后,选定与凋亡相关的基因caspase10作为mir-186*下游的可能靶基因。②与对照组相比,姜黄素处理后mir-186*的表达明显下调,提高了其下游靶基因caspase10的表达水平,并且加速A549细胞的凋亡;反之,转染mir-186* precursors和precursor controls后,与precursor controls相比,mir-186*的表达明显上调,降低了其下游基因caspase10的表达水平,并且减少A549细胞的凋亡。③与对照组相比,姜黄素处理后mir-186*的表达明显下调,加速A549/DDP细胞的凋亡,细胞存活率下降;转染mir-186*的precursors和precursor controls后,与precursor controls相比,mir-186*的表达上调,减少A549/DDP细胞的凋亡,细胞存活率增加。结论:1. caspase10是mir-186*下游靶基因之一。2.姜黄素可通过调控mir-186*的表达,进而调控mir-186*下游靶基因caspase10的表达。3.调控mir-186*的表达很可能是姜黄素促进肺腺癌细胞A549和A549/DDP凋亡的重要机制之一。
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