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第一部分:脂肪组织基质血管组分的分离与培养目的:从大鼠脂肪组织中分离、培养具干细胞标志的基质血管组分(stromal vascular fraction,SVF)细胞,为干细胞的研究和应用寻求更便捷的来源。方法:采用Ⅰ型胶原酶消化分离SD大鼠皮下脂肪组织,离心后取沉淀层细胞,贴壁培养。免疫荧光法检测CD31、CD34阳性表达。结果:第2代源于脂肪组织的基质血管组分,免疫荧光显示CD31阴性、CD34阳性。结论:大鼠脂肪组织中可分离出含有具干细胞标志的SVF。第二部分:荧光标记的脂肪组织基质血管组分移植对大鼠急性心肌梗死的治疗观察目的:用带GFP的慢病毒感染SVF后,移植到大鼠急性心梗部位,观察其在心肌组织内存活、分布情况及对大鼠心肌结构和功能的影响。方法:通过结扎冠状动脉左前降支制作SD大鼠急性心肌梗死模型。随机将24只大鼠分为假手术组、心梗对照组和SVF移植组,每组8只。建模1h后,假手术组和心梗对照组心外膜下注射磷酸盐缓冲液(PBS)各100μl,SVF移植组同法注射SVF 100μl(细胞数1×106),各组大鼠分别于手术后2周检测心功能;取心肌缺血部位组织冰冻切片,用荧光显微镜观察心肌细胞荧光信号及其分布情况;HE染色观察各组大鼠心肌的病理改变并用计算机图象分析测定梗死面积;免疫组化法检测心肌组织中内皮细胞标志CD31的表达情况测定血管内皮密度。结果:1.心功能测定显示,+dp/dtmax:假手术组4830.74±863.36mmHg/s,心梗对照组1952.94±635.13mmHg/s,SVF移植组2742.65±659.50mmHg/s;-dp/dtmax:假手术组-4407.80±396.07mmHg/s,心梗对照组-1871.67±306.92mmHg/s,SVF移植组-2448.14±532.27 mmHg/s;LVEDP:假手术组-3.14±7.95mmHg,心梗对照组38.86±17.79mmHg,SVF移植组7.17±15.58mmHg。与心梗对照组相比,SVF移植组LV+dp/dtmax、-dp/dtmax均明显上升(P<0.05),而LVEDP显著降低P<0.05);二者与假手术组相比,LV+dp/dtmax、-dp/dtmax均明显降低(P<0.01),LVEDP显著升高(P<0.01);2.SVF移植组在缺血心肌组织局部及梗死区边缘有GFP荧光标记细胞分布;3.与假手术组相比,心梗对照组心肌细胞明显减少,室壁变薄,周围纤维组织增生明显;与心梗对照组相比,SVF移植组心肌细胞坏死减少,部分心肌得到恢复,周围纤维化程度减轻;4.HE染色计算机图象分析显示,心梗面积:假手术组1%,心梗对照组38.22%,SVF移植组34.34%。与心梗对照组相比,SVF移植组心梗面积明显减少(P<0.05);二者均明显大于与假手术组(P<0.01);5.心肌免疫组化显示,反映血管内皮的CD31阳性细胞数:假手术组14.5个/视野,心梗对照组6.43个/视野,SVF移植组9.43个/视野。与心梗对照组相比,SVF移植组心梗区心肌组织CD31表达明显增高(P<0.05);二者均低于假手术组(P<0.01)。结论:1.带GFP的慢病毒载体可作为移植细胞的示踪标记;2.慢病毒感染标记的SVF经移植后在宿主心肌内能够存活,并减少心梗区面积;3.SVF可促进急性心肌梗死大鼠心功能的改善及梗死区血管增生。