大鼠失血性休克后不同液体复苏对脾脏髓系抑制细胞数量变化影响的研究

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研究背景及目的失血性休克是严重创伤及外科手术中常见的合并症,不仅表现在循环功能失衡,同时伴随着严重的免疫系统紊乱。研究表明,休克能增加宿主对外源性和内源性感染的易感性,促使感染率的增加,这与其引起的免疫抑制有关。近年来,一群髓系来源的细胞因在免疫系统中有负向调控的作用而受到关注,这群细胞首先在肿瘤患者体内发现,并逐渐统一命名为“髓系抑制细胞(myeloid—derivedsuppressorcells;MDSCs)”,参与肿瘤免疫逃逸。2007年,Delano等将这些细胞的研究由肿瘤学扩展到感染免疫领域。研究表明,MDSCs对休克后伴随的免疫反应产生重要影响。失血性休克后,炎症因子网络被触发,若不能及时终止其发生发展,常可导致免疫紊乱。目前,失血性休克后治疗的主要手段之一是液体复苏,但至今没有确凿证据表明哪种液体更好。本文研究的目的:建立一个稳定可靠的失血性休克模型,在此基础上初步探讨失血性休克不同液体复苏后脾脏中MDSCs数量变化,筛选出对失血性休克免疫抑制逆转作用较强的复苏液体并指导以后的干预治疗。对象及方法1.72只SD大鼠,随机分成4组,假手术组(Sham组)、高渗氯化钠复苏组(HRS组)、乳酸林格氏液复苏组(LRS组)、晶胶液复苏组(LCRS组),Sham组仅接受麻醉,置管及动脉监测,不予放血,其余组大鼠建立失血性休克模型。2.失血性休克模型,参照Chaudry方法建立失血性休克模型,快速放血至已肝素化的储血瓶内,在10分钟内将平均动脉压降至40mmHg为目标,期间通过调节放血速度控制血压。3.模型制作成功后,分别以不同的液体(高渗氯化钠液,乳酸林格氏液,晶胶液)进行复苏,复苏后12,24,48小时分别处死(颈椎脱位法处死大鼠)各组大鼠6只(包括假手术组),取脾脏组织。4.将脾脏组织制作成细胞悬液,His48、CD11bc试剂双标后用流式细胞仪检测各组脾脏中MDSCs,计算MDSCs的比例变化。结果1.参照Chaudry法成功建立失血性休克模型,达到平均动脉压40mmHg的要求。2.假手术组在三个不同时间点脾脏中MDSCs数量变化在统计学上无明显差异。3.相比于假手术组,失血性休克复苏后MDSCs数量均有不同程度的升高,差异明显,有统计学意义,其数量变化有先升后降的趋势。4.三种不同的复苏液体,在三个不同时间点以高渗盐组复苏后MDSCs数量升高程度相对较小。12h时,与晶胶液相比,差异不明显,与乳酸林格氏液比,差异显著。但在24h,48h同另两组相比,具有统计学意义。结论1.用Chaudry法建立的失血性休克模型,操作简便,易于复制,能反映失血性休克的发病过程和临床特征。2.假手术组机体损伤较小,MDSCs变化无统计学差异,说明实验动物通过自我保护反应,维持机体免疫平衡。3.失血性休克复苏后,机体的免疫功能早期受到不同程度的抑制,随时间变化逐渐恢复。4.相对于乳酸林格氏液﹑晶胶液,高渗氯化钠液复苏失血性休克,能有效抑制脾脏中MDSCs数量,减轻休克后早期的免疫抑制。
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