婴儿胆汁淤积症是婴儿期较常见的疾病，已成为我国小儿肝病住院的首要原因。其病因纷繁复杂，多由感染或胆道系统发育异常所致，也存在自身免疫及遗传代谢等多种原因。如治疗不及时，胆汁淤积致使胆盐及其他胆汁毒性成分在肝细胞内及全身蓄积可加速肝细胞损害，影响患儿发育，造成营养不良，部分可发生胆汁淤积性肝硬化。肝纤维化为慢性肝病进展为肝硬化的共同病理基础与必经阶段，阻止或逆转肝纤维化将是未来抗肝纤维化研究的方向。目前公认肝活检为明确肝纤维化的金标准，而对能够敏感反映肝纤维化的血清学指标研究甚少。因此，本研究旨从临床及动物实验两方面探讨胆汁淤积性肝纤维化中肝功能与肝纤四项指标及肝脏组织病理对肝纤维化分级的相关性分析，期望有助于找到简便易行、安全经济、用于早期诊断与临床监测婴幼儿胆汁淤积性肝纤维化程度、判定药物疗效的敏感血清学指标。第一部分：婴儿胆汁淤积症患儿肝纤四项与肝功能指标的相关性分析目的：探讨婴儿胆汁淤积症患儿肝纤四项与肝功能指标的相关性。方法：我院儿科2012年5月-2013年12月门诊及住院的婴儿胆汁淤积症患儿(实验组)30例；在我院常规体检的健康婴儿(对照组)20例，分组不拘性别，月龄在18个月以内。采其静脉血，应用生化检验速率法及生化检验比色法分别检测血清肝功能(血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、胆碱酯酶(CHE)和胆汁酸(TBA))；应用放射免疫分析法检测血清肝纤四项(透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层粘蛋白(LN)及Ⅳ型胶原(cⅣ))。结果：①肝功能指标：实验组肝功能(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)统计结果分别为：117.900±261.894(U/L),115.567±208.786(U/L),103.970±74.226(umol/L),55.057±41.516(umol/L),48.247±47.440(umol/L),169.300±184.600(U/L),6.639±1.936(KU/L),49.447±58.214(umol/L)；对照组肝功能(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)统计结果分别为：11.900±1.917(U/L),29.450±3.602(U/L),7.140±1.632(umol/L),2.165±0.555(umol/L),4.975±1.212(umol/L),11.000±1.487,(U/L)9.601±1.171(KU/L),3.195±2.587(umol/L)。各项P值分别为：P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01,P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01，实验组ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、TBA均明显高于对照组，CHE明显低于对照组，有显著性差异。②肝纤四项指标：实验组肝纤四项(HA、PCⅢ、LN、cIV)统计结果分别为：201.273±177.030(ng/ml),541.877±170.920(ng/ml),123.637±19.322(ng/ml),134.371±44.984(ng/ml)；对照组肝纤四项(HA、PCⅢ、LN、cIV)统计结果分别为：81.165±7.319(ng/ml),141.314±26.609(ng/ml),116.209±8.374(ng/ml),78.430±10.205(ng/ml)。各项P值分别为：P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.452＞0.05, P=0.000＜0.01，实验组HA、PCⅢ、cIV与对照组相比均明显增高，有显著性差异。③肝功能与肝纤四项指标的相关性分析：HA与AST、γ-GT呈正相关，r=0.736, P=0.000＜0.01，r=0.599, P=0.000＜0.01；HA与ALT、CHE、TBA呈负相关，r=-0.627, P=0.000＜0.01，r=-0.427, P=0.042＜0.05，r=-0.463, P=0.035＜0.05。cⅣ与γ-GT呈正相关，r=0.466, P=0.025＞0.05；cⅣ与CHE呈负相关，r=-0.520, P=0.011＜0.05。结论：①婴儿胆汁淤积症患儿的肝功能(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)及肝纤四项中的(HA、PCⅢ、cⅣ)与正常健康婴儿存在统计学差异。②血清HA、cⅣ、γ-GT与CHE的水平是提示婴儿胆汁淤积性肝纤维化的敏感指标。第二部分：胆汁淤积新生大鼠肝功能、肝纤四项与肝组织病理的相关性分析目的：探究胆汁淤积新生大鼠肝功能、肝纤四项与肝组织病理纤维化程度的相关性。方法：健康的3周龄Spragne-Dawlay大鼠38只，雌雄各半，体质量50-70g，随机分为胆汁淤积模型制备组(实验组)20只、对照组10只、空白对照组8只。实验组试喂养24小时后给予1%α-萘异硫氰酸酯(ANIT)75mg/kg灌胃。对照组同时给予玉米油灌胃，灌胃的容量和时间均与实验组一致，灌胃前后均禁食12小时。空白对照组同步喂养。灌胃48小时后断头采血，采血前禁食12小时，应用生化检验速率法及生化检验比色法分别检测血清肝功能(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)，应用放射免疫分析法检测血清肝纤四项(HA、PCⅢ、LN、cIV)。后从肝右叶切取1.0×0.8×0.3cm肝组织，置于10%甲醛溶液中固定，脱水、包埋，切片后作苏木素-伊红、Masson及天狼星红-饱和苦味酸染色。结果：①肝功能指标：实验组肝功能(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)统计结果分别为：633.167±248.799(U/L),2080.167±704.386(U/L),144.811±24.901(umol/L),132.789±23.431(umol/L),12.022±5.597,(umol/L)19.944±10.367(U/L),0.256±0.041(KU/L),675.656±84.736(umol/L)；对照组肝功能(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)统计结果分别为：48.875±14.035(U/L),349.500±114.409(U/L),3.275±0.870(umol/L),2.850±0.907(umol/L),0.425±0.292(umol/L),0.750±1.035(U/L),0.256±0.038(KU/L),198.013±120.474(umol/L)；空白对照组肝功能(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)统计结果分别为：36.143±11.335(U/L),320.714±148.833(U/L),2.429±0.665(umol/L),1.927±0.687(umol/L),0.500±0.332(umol/L),0.143±1.574(U/L),0.267±0.026(KU/L),113.029±87.370(umol/L)。实验组与对照组肝功能各项比较， P值为：P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.141＞0.05,P=0.000＜0.01；实验组与空白对照组肝功能各项比较，P值为：P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01,P=0.000＜0.01, P=0.687＞0.05,P=0.000＜0.01；对照组与空白对照组肝功能各项比较，P值为：P=0.078＞0.05, P=0.679＞0.05, P=0.094＞0.05,P=0.072＞0.05, P=0.649＞0.05, P=0.463＞0.05, P=0.053＞0.05, P=0.147＞0.05，实验组除CHE外，各项均高于对照组，有显著性差异。②肝纤四项指标：实验组肝纤四项(HA、PCⅢ、LN、cIV)统计结果分别为：2004.179±479.859(ng/ml)，45.520±2.155(ng/ml)，48.512±6.505(ng/ml)，30.275±10.823(ng/ml)；对照组肝纤四项(HA、PCⅢ、LN、cIV)统计结果分别为：1030.073±541.191(ng/ml)，46.627±2.633(ng/ml)，34.413±10.812(ng/ml)，20.079±2.700(ng/ml)；空白对照组肝纤四项(HA、PCⅢ、LN、cIV)统计结果分别为：1018.951±555.132(ng/ml),36.200±9.647(ng/ml),27.571±6.2460(ng/ml),18.328±5.593(ng/ml)。实验组与对照组肝纤四项各项比较，P值为：P=0.000＜0.01, P=0.304＞0.05, P=0.001＜0.01, P=0.000＜0.01；实验组与空白对照组肝纤四项各项比较，P值为：P=0.000＜0.01, P=0.096＞0.05, P=0.003＜0.01, P=0.000＜0.01；对照组与空白对照组肝纤四项各项比较，P值为：P=0.972＞0.05, P=0.086＞0.05,P=0.476＞0.05, P=0.151＞0.05，实验组除PCⅢ外，各项均明显高于对照组，有显著性差异。③肝脏组织病理学纤维化程度评分：实验组、对照组与空白对照组的统计结果分别为：2.050±0.621,0.440±0.527,0.130±0.354，实验组与对照组、与空白对照组比较均有统计学意义(P=0.000＜0.01, P=0.000＜0.01)。④肝脏组织病理学变化：苏木素-伊红及Masson染色：对照组及空白对照组可见完整而清晰的肝小叶，肝细胞排列整齐，呈条索状向四周放射，在汇管区未见明显纤维组织增生及炎性细胞浸润，中央静脉及汇管区的结缔组织亦未见异常增生；而在实验组，发现正常的肝小叶结构已被破坏或消失，几乎都出现了较明显的肝纤维化，25%-75%的肝组织出现脂肪变性、坏死，以及气球样变，仅有少量正常肝细胞残存，在肝细胞及小胆管可见淤胆，在汇管区和肝小叶坏死区可见明显增生的纤维组织，伴随着大量嗜中性粒细胞及嗜酸性粒细胞浸润，增生的纤维组织形成分支状的纤维间隔，将原有的肝小叶分割成为假小叶。经Masson染色显示实验组的肝脏组织形成了大量围绕脉管和小胆管的绿色胶原纤维，而对照组及空白对照组未见明显绿色胶原纤维形成。天狼星红-饱和苦味酸染色：实验组肝小叶内可见大量红色胶原纤维，经偏光显微镜观察，大量为粗大的黄红色纤维，这些纤维的折光性较强，主要分布在小叶中央静脉以及肝窦周围间隙，在汇管区也可见呈星芒状分布，部分伸展进入肝小叶内，形成小叶间分隔；也存在少量纤细绿色纤维，这些纤维显示弱的双折光性，主要分布于汇管区、小血管壁及中央静脉等处，肝窦周围间隙也可见少量分布，而在对照组及空白对照组均未见明显胶原形成。⑤实验组肝功能与肝纤四项相关性分析：HA与ALT、γ-GT呈正相关，r=0.474, P=0.047＜0.05，r=0.531, P=0.023＜0.05；PCⅢ与TBIL、DBIL、γ-GT、TBA呈正相关，r=0.645, P=0.004＜0.01，r=0.653, P=0.003＜0.01，r=0.535, P=0.022＜0.05，r=0.616, P=0.006＜0.01；cⅣ与γ-GT呈正相关，r=0.495, P=0.037＜0.05。⑥实验组肝功能与肝脏组织病理相关性分析：肝纤维化病理分级与γ-GT呈正相关，r=0.617, P=0.006＜0.01。⑦实验组肝纤四项与及肝脏组织病理相关性分析：肝纤维化病理分级与HA呈正相关，r=0.833, P=0.000＜0.01。结论：①新生大鼠经1%ANIT75mg/kg灌胃48小时后可诱导形成胆汁淤积性肝纤维化模型，其病理特征符合人类肝纤维化特点。②动物实验示肝纤维化病理分级与HA、γ-GT呈正相关，从病理学角度进一步证实了HA及γ-GT是良好反应早期肝纤维化程度的指标。