茚三酮分光光度法分析赖氨酸硫酸盐中L-赖氨酸含量的研究

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赖氨酸是人体必需而又无法自身合成,是人体必需的八种氨基酸之一,是唯一的仅L-型成分才能有效利用的,故称为“特殊必需氨基酸”。赖氨酸在维持体内酸碱平衡,合成血红蛋白,促进大脑神经细胞的再生,参与脂肪代谢,提高人体免疫,保持人体氮平衡等生理活动中发挥着重要作用。赖氨酸常以盐类晶体存在,因为赖氨酸呈弱碱性,吸收空气中的二氧化碳;易溶于水,在水中的溶解度大,以赖氨酸的晶体形式很难存在。作为赖氨酸产品饲料添加剂,主要有两类:赖氨酸硫酸盐和赖氨酸盐酸盐。赖氨酸盐酸盐是结晶产品,比较纯净。赖氨酸硫酸盐产品是发酵液干燥后产物,包括了赖氨酸硫酸盐及其它发酵副产物,不是单一化合物,故赖氨酸含量的检测不能用常规滴定方法。因此很有必要探索一种快速,高效的,准确的检验方法,满足饲料添加剂赖氨酸硫酸盐生产过程需要。本文分析了茚三酮分光光度法用于赖氨酸含量检测的实验条件,并用国家标准对该方法进行了方法验证;最后用该方法在赖氨酸生产厂的实际应用,结论如下:(1)摸索茚三酮分光光度法检测赖氨酸的最佳实验条件。赖氨酸浓度在0.05-0.5mg/ml,颜色稳定,1ml茚三酮显色剂,加热至100℃的沸水,加热15分钟,检测波长480nm,采用1厘米比色皿,检测吸光度。用新检测方法对0.3mg/ml赖氨酸标准溶液进行10次平行实验,实验数据用单尾和双尾的t检验,显示无系统误差,测量结果与标准值无统计学差异。(2)结合国家标准GB/T27025/ISO17025《检测和校准实验室能力认可通用要求》《检测和校准实验室能力认可准则》,以及《ICH三方协调指导原则》对茚三酮分光光度法进行验证,样品加标回收率在98%-102%,精密度相对标准偏差小于2%,0.02mg/ml-0.5mg/ml之间线性良好,方法不确定度在1.67%,专属性实验表明蛋氨酸、苏氨酸、谷氨酸不影响准确性。满足国家标准对检验新方法的要求规定。(3)将建立的茚三酮分光光度法检测赖氨酸用于中粮生化赖氨酸硫酸盐车间进行赖氨酸生产过程检测,实验显示使用效果良好。发酵液样品回收率在98%-104%,赖氨酸硫酸盐成品的样品回收率在99-102%。
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