【摘 要】
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本论文研究了甲基对硫磷水解酶MPH（methyl parathion hydrolase E.C.3.1.8.1）的纯化步骤、理化性质及动力学参数，优化了生产Pseudomonas sp WBC-3的产酶培养基，研究了粗酶乳剂的制备。 我们根据Pseudomonas sp WBC-3的生长特性及产酶情况，以阳离子交换层析纯化胞内粗蛋白中，使酶的比活提高了49.1倍，得到了均一的目的蛋白MPH
【机 构】
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中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）
【出 处】
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中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所)
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本论文研究了甲基对硫磷水解酶MPH（methyl parathion hydrolase E.C.3.1.8.1）的纯化步骤、理化性质及动力学参数，优化了生产Pseudomonas sp WBC-3的产酶培养基，研究了粗酶乳剂的制备。 我们根据Pseudomonas sp WBC-3的生长特性及产酶情况，以阳离子交换层析纯化胞内粗蛋白中，使酶的比活提高了49.1倍，得到了均一的目的蛋白MPH，SDS-PAGE验证为单一的条带，。比较了该菌和Flavobacterium sp.中的粗酶对不同底物的酶活，该菌中MPH水解甲基对硫磷和杀螟松的比活大于Flavobacterium sp.中的OPH（organophosphorase hydrolasc），而水解乙基对硫磷的比活则小于OPH。根据对纯化后的MPH的理化性质及动力学参数的研究表明，该酶催化水解反应最适pH为11.0；最适反应温度为40℃；该酶从40℃到60℃的热稳效果较好，70℃以上则很容易失活；Cd2+和Fe2+对酶有明显的促进作用，而Hg2+，Zn2+，Al3+和Bi3+则明显地抑制酶的水解反应；对该酶变性后及变性前的分子量的比较表明该酶为一个分子量约为34,250Dalton的单体。甲基对硫磷为该酶的最适底物，Km为0.0807mM，kcat为2.1×106min-1。比较该酶分别作用于甲基对硫磷，乙基对硫磷及杀螟松的Km、kcat的值可知，该酶对甲基对硫磷的底物亲和力最大，水解效率最高。其次为杀螟松，最后为乙基对硫磷。GC和HPLC的结果显示MPH还可以降解毒死蜱。 我们对生产菌种Pseudomonas sp WBC-3的培养基进行了摸索和优化，得出了既经济又可以高效产酶的培养基配方。在此基础上，还用发酵获得的粗酶液与不同类型的乳化剂配比，制备乳剂，并对比研究了各自的保存时间和条件，从中得到了具应用价值的乳剂配方。
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