论文部分内容阅读
目的:对黑龙江省阿城地区某育肥牛养殖场人、畜共患皮肤癣菌病病原菌进行分离培养,利用形态学、生理学、分子生物学方法对分离菌株进行鉴定,利用分子生物学方法分析致病菌株同源性是否一致。 方法:以患有皮肤癣菌病的饲养人员和病畜为研究对象,刮取患者和病畜皮损处皮屑直接镜检,镜检阳性标本接种于沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上,当分离培养所获得的可疑菌株菌落生长至足够大时挑取可疑菌落,以点接种法,分别接种于溴甲酚紫乳固体琼脂酵母提取物培养基平皿上,观察菌落形态及水解晕形成情况。挑取可疑菌落少量菌丝接种到小培养的培养基上,培养基为毛癣菌琼脂3培养基,通过对菌落形态学观察做进一步鉴定。初步鉴定为疣状毛癣菌后,从分离菌株中随机抽取来自患者和病畜的分离菌株进行rDNA的ITS基因序列进行测序,做进一步鉴定。同时,利用RAPD法分析18株菌的基因型特点,分析菌株同源性是否一致。 结果:对患者和病畜皮损处皮屑直接镜检,镜检结果均为阳性。将分离培养所得菌落接种于溴甲酚紫乳固体琼脂酵母提取物培养基平皿上,28℃条件下培养72小时可见明显水解晕。挑取可疑菌落做铜圈法小培养,培养约1周后,镜下观察可见大量菌丝、梨形或棒状小分生孢子和链状厚膜孢子。培养约2周时,镜下可见鼠尾状大分生孢子。偶尔可以见到棒状大分生孢子。此后进行ITS序列blast分析,进一步证实该菌为疣状毛癣菌。同时,利用RAPD法分析菌株基因型特点,分析结果证实此次人畜共患皮肤癣菌病致病菌同源性一致。 结论:引起阿城地区某牧场人、畜共患皮肤癣菌病的致病菌为疣状毛癣菌。18株分离菌株同源性一致证实该养殖场牛及饲养人员所患皮肤癣菌病系由同一株疣状毛癣菌引起。