Tat及其介导的纳米粒子的穿膜机制研究

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Tat多肽来源于HIV-1,能介导多种外源性物质如基因、蛋白、多肽、化学合成的纳米颗粒性物质等进入细胞甚至细胞核,它是一种很有前途的载体材料,可能成为基因治疗和药物治疗的载体。然而迄今为止,有关Tat及其介导的物质的穿膜递送机制仍然不清楚。本文首先提取骨髓基质干细胞(BMSCs),一方面为研究穿膜机制提供细胞,另一方面为提取的干细胞及其诱导分化奠定基础;然后探讨了Tat及其介导的明胶-硅氧烷、Au-Au2S和Au纳米粒子作为潜在的基因和药物释放载体在BMSCs和Hela细胞的穿膜递送作用。本文的主要研究结果如下:1)密度梯度离心法分离和培养得到了较为纯化的兔骨髓基质干细胞(BMSCs),并成功地诱导其分化为成骨细胞。2) Tat在<25μM浓度范围时无细胞毒性;穿膜效率随浓度的增加而提高,但当浓度在10μM时达到饱和,无血清培养比有血清培养内化效率高,破坏ATP和4℃时内化效率下降;Tat以脂筏介导的巨胞饮方式进入BMSCs和Hela细胞。3) Tat介导的明胶-硅氧烷纳米粒子的穿膜递送在4℃时受到抑制并具有ATP依赖性;以脂筏介导的巨胞饮方式进入BMSCs,而以clathrin蛋白受体介导的内化方式和脂筏介导的巨胞饮两种途径进入Hela细胞。4) Tat介导的近红外敏感的Au-Au2S纳米粒子穿膜递送在4℃受到抑制并具有ATP依赖性;以clathrin蛋白受体介导的内化方式和脂筏介导的巨胞饮两种途径进入BMSCs,而以脂筏介导的巨胞饮内化方式进入Hela细胞。
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