疣孢漆斑菌原生质体制备、再生和诱变育种研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:langjitianya198411
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,能催化酚类化合物的氧化,广泛地应用于工农业生产中。为了获得高产菌株,本文研究了产漆酶疣孢漆斑菌Ws2-6原生质体制备与再生的影响因子,在此基础上用NTG对制备的原生质体进行诱变,筛选了高酶活的优良菌株,并优化了产酶条件。   通过对酶的种类、酶的组合、酶液浓度、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂等因素的研究获得了制备疣孢漆斑菌Ws2-6原生质体的有效条件。采用0.7 mol/L氯化钠为渗透压稳定剂,在pH6的磷酸缓冲体系中,以15 mg/ml溶壁酶、5 mg/ml纤维素酶R-10和10 mg/ml蜗牛酶的混合酶液处理培养18h的菌丝体,30℃、80r/min振荡酶解6小时,原生质体产生量达到最大值7.83×106个/ml。在单层PDA培养基上30℃培养,Ws2-6原生质体形成率达82%,再生率为8.7%。此外,对原生质体释放的跟踪观察发现,疣孢漆斑菌原生质体释放有顶端、侧端释放两种方式。   以NTG为诱变剂处理原生质体,采用含致死剂量的愈创木酚选择性平板筛选了高产漆酶菌株。确定了愈创木酚对Ws2-6的致死浓度为0.2%。NTG对疣孢漆斑菌Ws2-6的原生质体进行诱变处理,利用平板初筛和摇瓶复筛,获得了三株酶活提高的突变菌株N-001、N-003和N-004,产酶活力由原来的750 U/ml提高到1300 U/ml、1825 U/ml和3075 U/ml。突变菌株经过5代传代,酶活稳定。   通过单因素实验分析了影响酶活的因素,获得了最佳产酶条件。三株突变菌产酶的最适碳源均为葡萄糖,其酶活最高值分别为1325 U/ml、1675 U/ml和2925 U/ml;Ws2-6最适氮源为酵母粉,其酶活最高值分别为1525 U/ml、1950 U/ml和5525 U/ml;检测了Azure-B、ABTS、碱木素和愈创木酚对突变菌株的诱导作用,结果发现,均能促进突变株N-001产酶,其最佳诱导作用的物质为Azure-B,酶活可达1575 U/ml;N-003的最佳诱导作用的物质为Azure-B,酶活可达1825U/ml,其余几种均有不同程度的抑制作用;N-004的最佳诱导作用的物质为Azure-B,酶活可达3075 U/m1,ABTS有一定得促进作用,而其余几种均有不同程度的抑制作用。
其他文献
汉江是长江中游最大的一级支流,发源于陕西省宁强县米仓山西端的蟠冢山,流经陕西省的汉中、安康地区,于白河县流入湖北省境内,在武汉市汉口注入长江,干流全长1567km,流域面积约15.9
进入21世纪,随着人口的持续增长以及经济压力对环境的影响,自然资源特别是土地利用变化领域的研究越来越受到大家的重视。河南省与江苏省作为中国中、东部地区的典型省份,其
大坝安全监控是根据大坝监测的数据资料,应用某种数学方法,建立能够有效地反映大坝效应集与外界荷载集间影响关系的监控模型,来模拟和预测大坝的运行性态,进而综合评价大坝的健康
目前我国地面灌溉面积占总灌溉面积的90%以上,随着农业生产的发展,我国氮肥施用量急剧增加,大量的氮肥损失经灌溉入渗进入到地下水中严重污染了地下水环境,结合我国农业当前现状,推