SIRT3蛋白在胰腺癌中的表达及抑瘤作用的研究

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目的:  观察SIRT3蛋白在胰腺癌中的表达情况,分析其在胰腺癌患者中的临床意义。构建SIRT3蛋白表达下调的胰腺癌细胞系,观察其凋亡和增殖能力,观察胰腺癌细胞中相关侵袭蛋白的表达情况。  方法:  采用免疫组织化学法和Western-blot检测SIRT3蛋白在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达情况,绘制胰腺癌患者生长曲线,并分析SIRT3的表达水平与各临床病理特征的关系。利用Real Time PCR检测五种胰腺癌细胞系中SIRT3 mRNA表达情况。利用SiRNA技术构建SIRT3蛋白表达下调的胰腺癌细胞系;采用流式细胞仪检测干扰前后胰腺癌细胞系的凋亡能力;采用MTT法检测干扰前后胰腺癌细胞系的增殖能力;采用Western-blot检测SIRT3蛋白表达下调对相关侵袭蛋白在胰腺癌细胞中表达情况的影响。  结果:  1、免疫组织化学法和Western-blot检测结果发现正常胰腺组织中的阳性表达率显著高于胰腺癌组织,差异具有统计学意义(P<0.01)。  2、胰腺癌细胞当中,SIRT3表达水平的高低和性别、年龄、肿瘤直径、病理分型(高中低分化)、淋巴结有无转移以及TNM分期均无关(P>0.05)。有、无血管侵犯的患者中SIRT3的阳性表达率有显著性差异(P<0.05)。  3、SIRT3阳性表达患者的存活时间比阴性表达患者长。  4、胰腺癌细胞系PANC-1中SIRT3 mRNA表达量最大,转染siRNA后发现staurosporine对胰腺癌si-Ctrl的凋亡显著高于si-sirt3(P<0.05)。  5、0h胰腺癌细胞si-Ctrl和si-sirt3两组患者细胞活力无差异(p>0.05),在48h和72h,si-sirt3胰腺癌细胞增殖活力显著高于si-Ctrl(p<0.05)。  6、除了MMP7以外,其余胰腺癌细胞中相关侵袭蛋白(MMP2、MMP7、MMP9、TIMP-1、Rho-A和Rho-B)表达,si-sirt3较si-Ctrl升高。  结论:  1、正常胰腺组织中SIRT3呈现高表达,在胰腺癌组织中SIRT3呈现低表达,且SIRT3在胰腺癌中的表达降低与血管侵犯相关。  2、SIRT3蛋白能够促进胰腺癌细胞的凋亡,并且能够抑制胰腺癌细胞增殖活力。  3、SIRT3蛋白能降低胰腺癌细胞中相关侵袭蛋白的表达,从而降低了细胞的侵袭能力。
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