论文部分内容阅读
目的：阿司匹林在结肠癌等肿瘤的防治中具有确切作用,但是长期服用阿司匹林引起的胃肠道出血等副作用制约了它的临床应用。黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的食物多酚类化合物,具有包括抗肿瘤作用在内的多种生物活性。芹菜素是一种在蔬菜、水果、茶叶中含量丰富的黄酮类化合物,具有抗肿瘤活性,有报道显示它可以增强抗肿瘤药物的抗肿瘤作用。本研究旨在观察芹菜素能否增强阿司匹林的抗结肠癌作用,并探讨其机制。方法：选取HT-29、 HCA-7、 Moser和DLD-1这4种结肠癌细胞系,设置阴性对照组、芹菜素(10μmol/L)单药组、阿司匹林(2.5、5、10mmol/L)单药组、联合用药组4种处理方式。将4种细胞种植在96孔培养板中,按上述4种处理方式处理细胞,在芹菜素单药组和联合用药组中加10μmol/L芹菜素,2小时后在阿司匹林单药组和联合用药组加不同浓度(2.5、5、10mmol/L)阿司匹林。每种处理方式设置3个复孔。置于培养箱中培养24、48、72小时后,在每孔中加入MTT溶液,培养箱中放置4小时后,完全除去培养基,加入DMSO溶解结晶。将培养板置于在酶标仪中,检测吸光度值,计算细胞增殖抑制率。将Moser细胞种植在6孔培养板中,不处理细胞,48小时后以裂解液裂解细胞,用SDS-PAGE分离胶分离细胞中的蛋白质并转移到PVDF膜上,用COX-2的抗体和HRP结合的二抗孵育,添加ECL显色液后收集图像,以此来检测4种细胞系的COX-2的表达。将Moser细胞种植在6孔板中,按上述4种处理方式处理细胞,48小时后以裂解液裂解细胞,用SDS-PAGE分离胶分离细胞中的蛋白质并转移到PVDF膜上,用COX-2的抗体和HRP结合的二抗孵育,添加ECL显色液后收集图像,以此来检测不同处理方式对COX-2的蛋白表达的影响。将Moser细胞种植在6孔板中,用上述4种方式处理细胞,48小时后用Trizol提取细胞总RNA,进行RT-PCR,在琼脂糖凝胶上电泳并收集图像,以此来检测不同处理方式对COX-2的mRNA水平的影响。将Moser细胞种植在6孔板中,上述4种方式处理细胞2小时后,用TNF-a处理细胞30分钟,然后用免疫印迹法检测不同处理方式对由TNF-a诱导的IκBa降解的抑制,以此来反映不同处理方式对NF-κB活性的影响。结果：芹菜素能剂量和时间依赖性地增强阿司匹林对表达COX-2的结肠癌细胞的增殖的抑制效果。COX-2在HCA-7、 Moser、 HT-29细胞中表达,而在DLD-1细胞中未检测到表达。芹菜素能剂量依赖性地抑制Moser细胞的COX-2的表达。芹菜素能增强阿司匹林对Moser细胞COX-2表达的抑制和对TNF-a诱导的IkB(x降解的抑制。结论：芹菜素能增强阿司匹林对表达COX-2的结肠癌细胞的增殖抑制作用,其机制涉及对NF-кB入核和COX-2表达的抑制。我们的研究为通过膳食补充黄酮类化合物增强抗肿瘤药物的作用,减少抗肿瘤药物的副作用提供了新的思路。