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背景:
胃癌是常见的恶性肿瘤之一,发病率及死亡率位于世界常见恶性肿瘤第二位。75%新发病例位于亚洲,以中国、日本、韩国发病率最高。其病因相当复杂,与年龄、性别、职业、慢性萎缩性胃炎、HP感染、遗传等因素有关,是遗传和环境等诸多因素相互作用所致,是一个多因素多步骤的过程,涉及到大量相关基因结构和表达调控的改变。cDNA微阵列技术分析基因表达谱具有高通量的特点,可以从整体水平上认识恶性肿瘤发生过程中相应的分子事件,目前的研究还局限于对得到的数据进行简单的倍数分析,缺乏系统分析胃癌差异表达基因的研究。前期研究发现差异表达基因中碳酸酐酶Ⅱ在胃癌中表达下调。碳酸酐酶参与维持体内水电解质,酸碱平衡,文献检索发现碳酸酐酶与肿瘤发生发展有关的主要有CAⅠ、CAⅡ、CAⅨ和CAⅫ四型。
目的:
采用 cDNA微阵列技术,寻找胃癌差异表达基因,根据基因功能将其进行分类研究,对其在胃癌形成过程中的相互作用进行初步探讨。采用分子生物学技术分析碳酸酐酶同功酶在胃癌及其对应正常胃粘膜中的分布和表达情况,确定其临床病理意义并初步探讨其在胃癌发生发展过程中的作用。
方法;
分别抽提、纯化胃癌及癌旁正常粘膜mRNA,通过逆转录方法用放射性标记33p分别标记两种mRNA.后与cDNA微阵列杂交,扫描芯片放射性信号图像,计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因建立基因表达谱,对所得差异表达基因进行系统分类,寻找相互关系。通过分子生物学方法检测碳酸酐酶同功酶在肿瘤及癌旁正常粘膜中的表达情况,分析其临床病理意义。
结果:
本实验发现二倍以上的差异表达基因138个,其中在胃癌组织中表达上调36个,表达下调102个。根据基因功能将差异表达基因分为15类。
免疫组化染色显示正常胃粘膜上,CAⅡ主要位于胃粘膜壁细胞,胞浆中可见颗粒状的阳性着色,粘膜表面染色较淡,粘膜间质呈阴性着色。胃癌组织较癌旁正常粘膜表达远远下降,呈弱阳性反应,部分病例完全没有阳性着色。Western blot显示胃癌中CAⅡ蛋白表达量减少。RT—PCR显示CA Ⅰ在32例癌旁正常组织中都有表达,癌组织中有11例表达强度基本不变,6 例中表达强度上升(19%),15例中表达强度下降(46%)。CAⅡ在32例癌旁正常组织中都有表达,癌组织中有2例表达强度基本不变,5例中表达强度上升(16%),25例中表达强度下降(78%)。CAⅨ在32例癌旁正常组织中都有表达,癌组织中有16 例表达强度基本不变,7例中表达强度上升(22%),9例中表达强度下降(28%)。CAⅫ仅在24例癌旁正常组织中有表达,在癌组织中则全部有表达,两者相比,癌组织中有7例表达强度基本不变,15例中表达强度上升(47%),10例中表达强度下降(31%)。CA Ⅰ和CAⅡ在胃癌组织中的表达较周围正常粘膜降低,CAⅨ在两者之间的表达相当,没有明显变化,CAⅫ在胃癌组织中的表达轻度升高,脆浆CAs表达的降低与患者性别、年龄、转移未见相关性,胞膜CAs表达的升高与患者性别、年龄、转移也未见相关性。
结论:
建立胃癌基因差异表达谱,并根据差异基因功能将其分为15类,胃癌的发病过程是一个多基因参与的过程,cDNA微阵列技术是快速有效筛选胃癌差异基因的方法。
正常胃粘膜中CAⅡ主要分布于胃粘膜壁细胞的胞浆中,胃粘膜表面细胞CAⅡ含量相对较少,粘膜间质呈阴性着色。胃癌组织中CAⅡ的表达下调,部分肿瘤出现表达缺失。碳酸酐酶同功酶在肿瘤组织中表达发生变化,CA Ⅰ和CAⅡ表达明显下降,CAⅨ表达几乎不变,CAⅫ表达上调。它们有可能成为胃癌的分子生物学标记之一。