【摘 要】
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鲨肝生长刺激素(sharp Hepatic Stimulator Substance sHSS)是从鲨鱼肝脏中提取的一种促肝细胞再生及保护肝脏物质。本课题对幼鲨肝脏中的肝刺激物进行了分离纯化,并研究了其对
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鲨肝生长刺激素(sharp Hepatic Stimulator Substance sHSS)是从鲨鱼肝脏中提取的一种促肝细胞再生及保护肝脏物质。本课题对幼鲨肝脏中的肝刺激物进行了分离纯化,并研究了其对肝源性细胞的促增殖作用,及对急性肝损伤、肝细胞线粒体呼吸功能和抗氧化能力等的影响。 利用改进后的LaBrecque等的方法,对鲨鱼肝脏中的HSS进行了部分纯化。研究中发现,95℃加热15分钟能导致大量活性蛋白失活,而在70℃时大部分活性能够保持。所以先提取幼鲨肝脏,物理研磨后,经过70℃加热20分钟,40%乙醇沉淀去除大部分杂蛋白。通过DEAE-SepharoseTM Fast Flow、Sephacryl S-100HR凝胶过滤,然后通过高效液相,最终获得到sHSS,经蛋白质N端测序,其N端部分氨基酸序列为:S,W,N,W,S;N,V,T,V,W,比活达到2941u/mg protein,纯化倍数达到56.8, 本课题利用[3H]—TdR掺入法研究sHSS的促肝细胞增殖活性,以肝源性细胞HepG2为指示细胞,发现其不但能明显促进HepG2细胞的增殖,而且sHSS浓度与HepG2细胞的刺激指数成正相关,当sHSS浓度为160μg/mL时,其对HepG2细胞的刺激指数达到5.33。 sHSS能显著修复CCl4、D-氨基半乳糖、硫代乙酰胺(TAA)引起的小鼠和TAA引起的大鼠急性肝损伤,治疗组血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平较对照组有了明显降低。而且TAA引起的急性肝损伤大鼠的存活率由原来的不足20%提高到大约80%。模型组的肝组织病理学检查结果发现肝小叶中央静脉周围肝细胞大面积变性、坏死,肝小叶肝细胞点、片状坏死,汇管区可见大量炎性细胞浸润和肝组织充血,肝细胞核破裂,肝纤维化及纤维间隔形成,脂肪变性明显,而sHSS治疗组肝细胞变性、坏死普遍减轻,坏死灶明显减少,多为散在分布,以点状坏死为主,整体的细胞形态较为完整,汇管区仅有少量炎性细胞浸润和肝组织充血,肝细胞只有轻度脂肪变性。由此说明
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