【摘 要】
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棘球蚴病也被称之为包虫病,是一种重要的人兽共患病,由带科棘球属绦虫的幼虫引起,遍布于世界各地;其中大多数由细粒棘球蚴和多房棘球蚴引起,包虫病对人体健康和全球畜牧业的发展构成了极大的威胁。本研究通过制备单克隆抗体的腹水,采用盐析和纯化,得到了纯度较高的单克隆抗体,ELISA法检测单克隆抗体效价,SDS-PAGE凝胶验证抗体纯度;分别对采集的中绦期幼虫与成虫进行形态学鉴定,制备可溶性抗原,应用抗棘球绦
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“细粒棘球绦虫成虫特异基因EgM9在成虫睾丸发育及产卵中的功能研究”支持与资助(项目编号:32060802)课题主持人:张壮志研究员;
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棘球蚴病也被称之为包虫病,是一种重要的人兽共患病,由带科棘球属绦虫的幼虫引起,遍布于世界各地;其中大多数由细粒棘球蚴和多房棘球蚴引起,包虫病对人体健康和全球畜牧业的发展构成了极大的威胁。本研究通过制备单克隆抗体的腹水,采用盐析和纯化,得到了纯度较高的单克隆抗体,ELISA法检测单克隆抗体效价,SDS-PAGE凝胶验证抗体纯度;分别对采集的中绦期幼虫与成虫进行形态学鉴定,制备可溶性抗原,应用抗棘球绦虫单克隆抗体对虫体抗原进行免疫学分析,分别评价五株单克隆抗体的特异性。结果:(1)五株抗棘球绦虫单克隆抗体效价均达到1∶80 000以上,经SDS-PAGE电泳检测,可清晰看见一条轻链与重链,证明抗体纯度达90%以上,表明保存的五株单克隆细胞经液氮冻存后仍具有较高的分泌抗体的能力。(2)四种中绦期幼虫经形态学与分子生物学鉴定,确定分别是多房棘球蚴、细粒棘球蚴、脑多头蚴、细颈囊尾蚴,经ELISA检测抗多房棘球蚴单克隆抗体1G11、1C1与其他虫体无交叉反应,与多房棘球蚴特异性反应;Western blot结果表明单抗1G11能特异性识别多房棘球蚴抗原,识别条带位于66~270 k Da之间;单抗1C1能特异性识别多房棘球蚴抗原,识别条带位于80~270 k Da间;两株单抗均与其他三种虫体无免疫印迹反应;免疫组化显示显示两株单抗均能识别多房棘球蚴抗原。(3)对采集的六种蠕虫结合生活史与形态学进行鉴定,鉴定该六种蠕虫分别为多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫、多头带绦虫、泡状带绦虫、犬弓首蛔虫、犬复孔绦虫。制备六种蠕虫抗原,BCA试剂盒法检测其浓度。运用抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体4D6对六种蠕虫成虫抗原进行特异性检测,ELSIA结果表明单抗4D6与其他五种虫体抗原无交叉反应,仅与多房棘球绦虫表膜抗原反应;Western blot显示单抗4D6能特异性识别多房棘球绦虫表膜抗原,识别蛋白条带位于30~120 k Da,单抗4D6与其他五种虫体抗原均不发生免疫印迹反应;免疫组化显示单抗4D6可识别多房棘球绦虫虫体,反应呈现在虫体表面。(4)抗细粒棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体1F3、4E8对六种蠕虫抗原进行特异性研究,ELSIA结果表明抗细粒棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体1F3、4E8仅与细粒棘球绦虫表膜抗原反应,与其他五种虫体抗原不反应;Western blot结果显示单抗1F3仅识别细粒棘球绦虫表膜抗原,识别抗原条带在65~170 k Da之间,单抗4E8仅识别细粒棘球绦虫表膜抗原,识别抗原条带在40~65 k Da;免疫组化结果显示:两株单抗均能与细粒棘球绦虫特异性反应。(5)五株细胞分别经上述检测,具有较高的特异性,均送中国典型培养物保藏中心保存。本研究旨在研究抗棘球绦虫单克隆抗体的生物活性,进而深入探究各株单克隆抗体的特异性,为包虫病的免疫诊断以及试剂盒的研制奠定基础。
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