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【目的】
通过研究IFNα-2b对人慢性粒细胞白血病急变期细胞系K562细胞增殖、细胞周期以及ERK基因(ERK mRNA)表达的影响,探讨IFNα-2b治疗白血病的机制及ERK在慢性髓系白血病发生发展中的作用,为寻找白血病治疗的新途径提供基础支持。
【方法】
1.体外培养白血病细胞株K562细胞,取对数生长期的细胞用于实验研究。
2.应用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0万 U/ml、0.25万U/ml、0.5万U/ml、1万U/ml、2万 U/ml、4万U/ml)的IFNα-2b在不同作用时间(24h、36h、48h、72h)对K562细胞增殖的影响。
3.应用流式细胞术检测IFNα-2b作用48小时前后K562细胞周期的变化。
4.应用Real time-PCR技术检测不同浓度(0万U/ml、0.25万U/ml、0.5万U/ml、1万U/ml)IFNα-2b作用48小时后K562细胞中ERK mRNA表达水平的变化。
【结果】
1.CCK-8法结果显示:IFNα-2b作用于K562细胞后,细胞的增值抑制率随时间的延长而逐渐升高,同一浓度不同时间之间比较,差异有统计学意义(P<0.05);IFNα-2b浓度在0万U/ml~1万U/ml之间变化时,细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而增大,同一时间不同浓度组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05);继续增加药物浓度,细胞增殖抑制率增加不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。
2.流式细胞术结果显示:K562细胞为高s期细胞。IFNα-2b作用于K562细胞后,G1期细胞比率较作用前升高,S期细胞比率下降,药物作用前后组问比较有明显差异(P<0.05)。
3.Real time-PCR技术检测不同浓度IFNα-2b对K562细胞ERK mRNA表达水平的影响,发现随着IFNα-2b浓度增加,K562细胞中ERK mRNA表达逐渐增高,各不同药物浓度组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。
【结论】
1.IFNα-2b对K562细胞的增殖有抑制作用。
2.K562细胞为高S期细胞。IFNα-2b作用于K562细胞后可以降低S期细胞比率,阻止K562细胞周期由G1期向S期转变。
3.IFNα-2b可增加K562细胞中ERK mRNA的表达水平,从而阻止其在信号传导通路中继续向下游传递信号,降低K562细胞增殖能力。