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目的：选择咪达唑仑和氯唑沙宗作为探针药物，建立灵敏、稳定的高效液相色谱法，测定大鼠肝微粒体孵育体系中咪达唑仑的代谢产物1-羟基咪达唑仑和氯唑沙宗的代谢产物6-羟基氯唑沙宗的生成量，来评价大鼠体外肝微粒体中CYP3A4和CYP2E1酶的活性。通过优化孵育体系条件，计算出咪达唑仑和氯唑沙宗在大鼠肝微粒体中的酶动力学参数。将不同体积浓度的肾康注射液和丹红注射液加入到大鼠肝微粒体孵育体系中，评价两种中药注射液对大鼠肝微粒体中CYP3A4和CYP2E1酶活性的影响，以预测药物相互作用的可能性。方法：测定1-羟基咪达唑仑的色谱条件：采用HypersilBDSC18柱(150mm×4.60mm，5μm)，流动相为10.0mmol/L磷酸氢二钾缓冲液-乙腈60:40（v:v），流速为1.00mL/min，柱温为30℃，检测波长为230nm。测定6-羟基氯唑沙宗的色谱条件：采用HypersilBDSC18柱(150mm×4.60mm，5μm)，流动相为50.0mmol/L磷酸氢二钠（pH=4.5）和乙腈，采用梯度洗脱的方式，流速为1.00mL/min，柱温为30℃，检测波长为290nm。分别将不同浓度的探针药物咪达唑仑和氯唑沙宗加入到大鼠肝微粒体孵育体系中孵育，测定1-羟基咪达唑仑和6-羟基氯唑沙宗浓度，以Lineweaver-Burk作图计算Km与Vmax值。将不同体积浓度的肾康注射液和丹红注射液分别与大鼠肝微粒体共孵育，分别考察其对大鼠CYP3A4和CYP2E1酶的活性影响。结果：咪达唑仑、1-羟基咪达唑仑及其内标卡马西平三者分离良好且无内源性干扰。1-羟基咪达唑仑线性范围0.300～20.0μmol/L。日内、日间精密度均小于10%，准确度在85%~115%范围内，处理回收率大于85%，稳定性均小于10%。咪达唑仑在大鼠肝微粒体体系中孵育45min，测得酶动力学参数Km为56.5μmol/L，Vmax为1.01nmol/min/mgprotein。氯唑沙宗、6-羟基氯唑沙宗及其内标非那西丁三者分离良好且无内源性干扰。6-羟基氯唑沙宗线性范围0.500～30.0μmol/L。日内、日间精密度均小于10%，准确度在85%~115%范围内，处理回收率大于85%，稳定性均小于10%。氯唑沙宗在大鼠肝微粒体体系中孵育45min，测得酶动力学参数Km为138.8μmol/L，Vmax为1.68nmol/min/mgprotein。在底物咪达唑仑的浓度为60μmol/L的孵育体系中，肾康注射液对CYP3A4的IC50值为10.0%，丹红注射液对CYP3A4的IC50值为2.9%。在底物氯唑沙宗的浓度为140μmol/L的孵育体系中，肾康注射液对CYP2E1酶活性无影响，丹红注射液对CYP2E1的IC50值为4.3%。结论：本实验建立了一种快速、稳定的高效液相色谱方法，可用于测定大鼠肝微粒体孵育体系中咪达唑仑及其代谢物1-羟基咪达唑仑，氯唑沙宗及其代谢产物6-羟基氯唑沙宗。通过优化条件，建立了体外微粒体孵育体系，以咪达唑仑和氯唑沙宗为CYP3A4和CYP2E1亚型酶的探针底物，评价出CYP3A4和CYP2E1酶动力学参数，并且考察了肾康注射液和丹红注射液分别对大鼠肝微粒体中CYP3A4和CYP2E1酶活性的影响。初步认为肾康注射液对大鼠肝微粒体中CYP3A4酶有抑制作用，对大鼠肝微粒体中CYP2E1酶活性无明显影响。丹红注射液对大鼠肝微粒体中CYP3A4和CYP2E1酶均有抑制作用。