水稻S<,5>旁侧区大片段TAC克隆及转化体系研究

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水稻S<,5>基因座位在控制水稻育性性状中起关键作用.为了更加有利于加快S<,5>旁侧区图位基因克隆的进度,工作人员使用了一种新型的图位克隆双元载体-TAC((Transformation-competent Artificial Chromosome)对S<,5>旁侧区两个不同的候选大片段进行了克隆.选择合适的酶切位点对这两个外源大片段进行了克隆.为了能使载体更加适合于在水稻中高效表达,工作人员初步对水稻中的一个多拷贝(1000ˉ2000)的重复序列-RRD3进行了研究,利用通用的植物启动子鉴定基因融合系统-pBI121对820bp的片段进行了启动子鉴定.转化体系还包括受体材料的选择及受体材料再生体系的建立,对应于S<,5>复等位基因间互作关系,工作人员初步选择的广亲和基因测交组合为辽粳X南京11,巴利拉X南京11,秋光X南京11(三种杂交组合的花粉及小穗育性适合于基因互作后的育性观察).为了获得较高的水稻愈伤组织诱导率,在CPslo-17品种进行了2,4-D与种子胚愈伤直接诱导的研究.
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