论文部分内容阅读
洋川芎内酯Ⅰ(SenkyunolideⅠ，SEⅠ)是中国传统中药川芎水煎液中的代表性成分，是藁本内酯体内和体外的主要代谢产物。药理学研究表明，SEⅠ能够减少H2O2对人体肝脏HepG2细胞和PC12细胞造成的氧化损伤，减轻刀豆素A(ConA)引起的红细胞变形性损害，抑制红细胞的聚集等。整体药效学研究表明，SEⅠ可能对偏头痛有一定的治疗作用。SEⅠ前期药代动力学研究结果显示，大鼠口服给于SEⅠ后，其在体内表现出吸收迅速、分布广泛、口服生物利用度为37.25％。但是其同样快速从体内消除，半衰期不足60 min。在对其体内代谢的研究中发现，SEⅠ在体内表现出代谢途径多、代谢广泛，这说明体内代谢可能是其在体内消除快的主要原因。本文在前期研究的基础上，从大鼠体内分离得到SEⅠ的4个主要代谢产物，并进行了SEⅠ及代谢物在大鼠体内的药物代谢动力学研究。 1.大鼠胆汁中代谢物的分离、纯化及结构鉴定 本文探索了利用体外肝微粒体孵化技术来得到SEⅠ的主要代谢物，结果发现，该方法并不是得到SEⅠ代谢物的最有效手段。因此，我们利用了色谱分离手段从大鼠胆汁中得到SEⅠ的主要的代谢产物。大鼠口服灌胃100mg·kg-1的SEⅠ溶液后，对收集得到的胆汁样品进行分离纯化，得到了SEⅠ在胆汁中的4个主要的代谢产物，利用UPLC/Q-TOF-MS和NMR技术对代谢物进行结构鉴定，确定4个代谢物分别为SEⅠ-6S-O-β-D-葡萄糖苷酸(M1)、SEⅠ-7S-O-β-D-葡萄糖苷酸(M2)、SEⅠ-7S-S-谷胱甘肽(M3)和SEⅠ-7R-S-谷胱甘肽(M4)。结果显示SEⅠ在体内发生谷胱甘肽结合反应主要在C-7位置的羟基，在体内可能发生了构型转换。 2.洋川芎内酯Ⅰ及其代谢物在大鼠体内的排泄研究 大鼠灌胃或尾静脉注射给予72 mg·kg-1 SEⅠ水溶液后，对尿液、胆汁和粪便中的SEⅠ及其代谢物进行了定量分析。在尿液的排泄研究中，检测到M1、M2和SEⅠ，结果显示，无论是灌胃还是静脉注射给药，M1、M2和SEⅠ在尿液中的累积排泄量均不高，特别是原形药，灌胃和尾静脉给药后其累积排泄百分率分别为（0.72±0.14）％和(1.21±0.49)％，灌胃给药后M1和M2的累积排泄率为（2.52±0.57）％和（2.02±0.56）％，尾静脉给药后M1和M2的累积排泄率为（3.27±0.62）％和（3.37±0.76）％;大鼠尾静脉给药后12 h，M1、M2和SEⅠ在尿液中的排泄量达到坪值，口服灌胃给药后24 h，M1、M2和SEⅠ在尿液中的排泄量达到坪值;胆汁排泄研究中，检测到M1、M2、M3、M4和SEⅠ，胆汁中主要是以代谢物的形式排泄，灌胃和尾静脉给药后原形药的累积排泄量同样很低，分别为（1.35±0.26）％和（1.72±0.59）％，灌胃给药后M1、M2、M3和M4的累积排泄百分率分别是（37.07±2.43）％、（16.29±3.18）％、(14.61±1.05)％和（25.91±3.15）％，尾静脉给药后M1、M2、M3和M4的排泄百分率分别是（32.48±5.80）％、（14.19±2.16）％、（15.72±2.18）％和(26.53±2.12)％;大鼠尾静脉给药后8h，M1、M2、M3、M4和SEⅠ在胆汁中的排泄量均达到坪值，口服灌胃给药后12h，M1、M2、M3、M4和SEⅠ在胆汁中的排泄量均达到坪值。粪便排泄研究中，只检测到原形药SEⅠ，结果显示，灌胃和尾静脉给药后，大鼠粪便中SEⅠ的累积排泄百分率分别为（4.35±1.89）％和(4.62±1.66)％;灌胃和尾静脉给药后36h粪便中的排泄量达到坪值。 综上，大鼠口服给药(72 mg·kg-1)后，原形药体内的累积排泄百分率为6.42％，SEⅠ分别以代谢物M1、M2、M3和M4的形式从大鼠体内排泄的累积排泄百分率分别为39.59％，18.31％、14.61％和25.91％，计算口服给药后的物质平衡为104.84％。尾静脉给药(72 mg· kg-1)后，原形药体内的累积排泄百分率为7.55％，SEⅠ分别以代谢物M1、M2、M3和M4的形式从大鼠体内排泄的累积排泄百分率分别为35.75％，17.56％、15.72％和26.53％，计算尾静脉给药后的物质平衡为103.11％。SEⅠ在体内主要以代谢物的形式排出体外，且以胆汁排泄为主，给药后36 h SEⅠ无论以哪种形式均排泄完全。 3.洋川芎内酯Ⅰ及其代谢物在大鼠体内的药动学研究 本文以大鼠为研究对象，对SEⅠ的药物动力学规律进行研究。大鼠灌胃给予不同剂量的SEⅠ溶液（36、72和144 mg·kg-1）后，吸收快速，其体内血药浓度在10～30 min内迅速达到最大浓度，并快速从体内消除，消除半衰期t1/2小于1h。各个剂量组间主要药动学参数MRT、CL和Vd均无显著性差异(p＞0.05)。血药浓度-时间曲线相互平行，AUC及Cmax与剂量成正比(r＞0.99)，即在实验剂量范围内，口服给药后，SEⅠ在大鼠体内具有线性动力学特征。尾静脉给药后，具有和口服给药类似的药动学特征，即快速分布，快速消除，并呈现线性动力学特征。口服给药后三个剂量绝对生物利用度分别为31.75％、52.43％和58.02％;给药后SEⅠ迅速在体内发生代谢，血浆中代谢物的AUC均小于原形药。