【摘 要】
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肝癌是全世界最常见的致命性恶性肿瘤之一,患者被确诊时大多为晚期,治疗常用呈剂量依赖的细胞毒性抗肿瘤药物如顺铂（cisplatin,DDP）。即使化疗被运用多年,但耐药性仍是使用的重要阻碍,所以联合能提高化疗敏感性的小分子物质可能是提高肝癌对DDP敏感的一种有效的治疗方案。低分子质量肝素（low molecular weight heparin,LMWH）不仅是抗凝药物,在其他方面也有不错的作用:抑
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肝癌是全世界最常见的致命性恶性肿瘤之一,患者被确诊时大多为晚期,治疗常用呈剂量依赖的细胞毒性抗肿瘤药物如顺铂（cisplatin,DDP）。即使化疗被运用多年,但耐药性仍是使用的重要阻碍,所以联合能提高化疗敏感性的小分子物质可能是提高肝癌对DDP敏感的一种有效的治疗方案。低分子质量肝素（low molecular weight heparin,LMWH）不仅是抗凝药物,在其他方面也有不错的作用:抑制肿瘤细胞血管生成和转移;通过影响Wnt信号通路抑制A2780卵巢癌细胞对DDP耐药的基因表达等。自噬是一种进化保守并可降解多余的细胞内物质和细胞器的自杀方式。研究表明LMWH联合化疗药物可增加自噬而导致癌细胞的死亡,那LMWH联合DDP是否能够调控肝癌细胞自噬从而增加肝癌对DDP的敏感性呢?目的:1.通过实验探讨DDP和LMWH联合作用能否抑制肝癌细胞的增殖;2.探讨DDP和LMWH单独及联合作用能否增强肝癌BEL-7404和SMMC-7721细胞的自噬;3.探讨DDP和LMWH单独及联合作用是否是通过AMPK-ULK1-Beclin1信号通路增强自噬。方法:将细胞分对照组（control组）、LMWH组、DDP组及LMWH与DDP联合组（L+D组）。1.CCK-8法检测DDP和LMWH对BEL-7404肝癌细胞增殖能力的影响;2.单丹磺酰尸胺（Dansylcadaverine,MDC）染色法检测每组BEL-7404和SMMC-7721肝癌细胞自噬现象的发生;3.Western Blot法和RT-PCR法检测肝癌BEL-7404和SMMC-7721细胞每组中自噬蛋白LC3和P62的蛋白及m RNA的表达情况;4.Western Blot法检测BEL-7404和SMMC-7721两种肝癌细胞每组中通路有关蛋白AMPK、ULK1、Beclin1和p-AMPK、p-ULK1的蛋白表达水平。结果:1.CCK-8法:与对照组相比,DDP组及L+D组的BEL-7404细胞增殖能力都下降,且L+D组增殖能力下降更显著（P<0.05）;2.MDC自噬染色法:与其他三组相比,BEL-7404和SMMC-7721肝癌细胞的L+D组中的绿色荧光自噬小体的数量明显增多（P<0.05）;3.Western Blot法和RT-PCR法检测自噬蛋白LC3和P62的表达:与其他三组比较,L+D组的BEL-7404和SMMC-7721肝癌细胞的LC3的蛋白及m RNA的表达显著增高,P62的蛋白及m RNA的表达显著下降（P<0.05）;4.Western Blot法检测通路蛋白的表达:L+D组的AMPK和ULK1蛋白的表达无明显变化（P>0.05）、但p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1以及Beclin1的蛋白表达却显著增高（P<0.05）。结论:1.从CCK-8细胞毒试验中得出:LMWH可增强DDP对BEL-7404肝癌细胞增殖能力的抑制作用;2.DDP与LMWH联合作用明显诱导了肝癌BEL-7404和SMMC-7721细胞自噬的增强;3.DDP与LMWH联合作用诱导肝癌BEL-7404和SMMC-7721细胞的自噬增强可能是通过激活AMPK-ULK1-Beclin1信号通路实现的。
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